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A bomba de Na+/K+ (Na, K-ATPase) é essencial para a manutenção da homeostase
iônica e da excitabilidade neuronal, exercendo papel relevante na dinâmica de
potenciais de membrana. Nas simulações de atividades epileptiformes não-sinápticas
(AENS), em geral, os modelos utilizam uma abordagem fenomenológica,
considerando reações muito rápidas e equilíbrio instantâneo, desconsiderando a
cinética das transições enzimáticas. Este trabalho teve como objetivo investigar os
efeitos da cinética da bomba de Na+/K+ no transporte iônico neuronal, por meio do
desenvolvimento e implementação de um modelo matemático expandido, com base
no esquema de Post-Albers, que incorpora reações com velocidades finitas entre os
subestados da enzima. Inicialmente, o modelo foi implementado de forma isolada para
simulação de manobras experimentais de aumento rápido da concentração de ATP.
Em seguida, foi incorporado a um modelo computacional de AENS, permitindo
analisar o efeito da bomba durante eventos ictais e interictais. Foram avaliadas três
versões do cálculo da corrente da bomba, que representa o seu efeito eletrogênico,
considerando diferentes mecanismos de associação entre os íons e enzima. As
simulações revelaram que a cinética da bomba influência o padrão de disparos
neuronais, a estequiometria do transporte iônico e a ocorrência de eventos pós-ictais,
sobretudo em condições de rápidas alterações iônicas na interface membranar. O
modelo proposto permitiu identificar regimes de funcionamento semelhantes a
fenômenos observados experimentalmente, como potenciais transientes de
população. Os resultados demonstram que a representação detalhada da bomba de
Na+/K+ é essencial para o aprofundamento da compreensão da excitabilidade
vii
neuronal em condições não-sinápticas e contribui para o entendimento de
mecanismos biofísicos subjacentes à dinâmica epileptiforme.

A Doença de Alzheimer é caracterizada pela formação de placas extracelulares
compostas de peptídeos beta-amiloide, deposição intracelular de emaranhados neurofibrilares
de proteína tau hiperfosforilada, estresse oxidativo e neuroinflamação. A enzima quinona
redutase 2 (QR2), tem se destacado como alvo terapêutico promissor relacionado à doença. Este
estudo aplicou uma abordagem computacional integrada, incluindo modelagem farmacofórica,
triagem virtual, ancoragem molecular, simulações de dinâmica molecular e cálculos de
MM/PBSA, para identificar e caracterizar potenciais inibidores da QR2.
A estrutura cristalográfica da QR2 (ID PDB: 4QOH) foi validada como modelo, com
redocking preciso (RMSD < 2,0 Å) e elevada capacidade preditiva (AUC > 0,80). A triagem
baseada em modelos derivados de melatonina e resveratrol resultou em 2.434 compostos com
propriedades ADMET favoráveis, dos quais cinco foram priorizados após consensus score.
Esses ligantes apresentaram interações estáveis com resíduos-chave do sítio ativo, como
PHE125A e TRP334B. As simulações revelaram que alguns compostos mantiveram alta
estabilidade conformacional e os cálculos de energia livre confirmaram forte afinidade de
ligação.
Os resultados indicam que os compostos identificados possuem potencial terapêutico
promissor como inibidores da QR2, contribuindo para o avanço de estratégias farmacológicas
no tratamento da Doença de Alzheimer.

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O propranolol, um betabloqueador não seletivo amplamente utilizado no tratamento de
diversas condições médicas, vem ganhando atenção por seu potencial papel na
ativação folicular ovariana, um processo crucial para a preservação da fertilidade. A
ativação folicular, que envolve a transição dos folículos primordiais para estágios mais
avançados, pode ser um recurso clínico valioso para mulheres com reserva ovariana
limitada, seja antes de procedimentos como cultura folicular, seja em protocolos de
estimulação ovariana. No primeiro estudo, foi investigada a ação do propranolol sobre a
ativação folicular, tanto por meio de experimentos in vitro quanto in vivo. Ovários
neonatos cultivados em presença do propranolol demonstraram uma redução no
número de folículos primordiais (p=0,0002), concomitante com o aumento dos folículos
transicionais (p = 0,008), primários (p = 0,0072) e secundários (p = 0,0284). Esses
achados foram acompanhados por alterações moleculares relevantes, como a
regulação negativa do gene Pten (p = 0,0305), um conhecido supressor da ativação
folicular e a regulação positiva do marcador Cpeb1 (p = 0,0112), associado à ativação
folicular. Complementando esses dados, os experimentos in vivo mostraram que o
tratamento com propranolol promoveu aumento nos níveis da proteína PI3K-p110 (p =
0,046), importante na via de sinalização de crescimento, além de diminuir a expressão
de Pten (p = 0,0359), confirmando o efeito estimulador da ativação folicular. No
segundo estudo, o foco foi avaliar os efeitos do tratamento prolongado com propranolol
no crescimento folicular e na integridade ovariana ao longo do envelhecimento
reprodutivo em camundongos. Camundongos foram tratados por períodos variados (7,
10 e 24 semanas) com doses diferentes de propranolol. Os resultados indicaram que,
mesmo com o uso prolongado, o propranolol não afetou parâmetros biométricos como
peso corporal, peso ovariano ou ciclo estral. Entretanto, houve um aumento
significativo na ativação folicular e na progressão até a fase antral, especialmente após
24 semanas de tratamento (p = 0,030), sem elevação da taxa de atresia folicular.
Adicionalmente, o tratamento com propranolol não alterou a resposta à superovulação
em camundongos jovens, mas apresentou efeito antifibrótico nos animais mais velhos,
reduzindo a deposição de colágeno (p < 0,0001). Esses estudos em conjunto sugerem
que o propranolol atua como um modulador eficaz da ativação folicular, favorecendo a
transição e crescimento dos folículos sem aumentar a degeneração folicular, e ao
mesmo tempo reduzindo processos de fibrose associados ao envelhecimento ovariano.
Dessa forma, o propranolol desponta como um fármaco promissor para aplicações
clínicas na preservação da fertilidade, seja em pacientes com falência ovariana
prematura, seja em contextos de envelhecimento reprodutivo, potencialmente
ampliando as opções terapêuticas para melhorar a função ovariana e a resposta a
protocolos de estimulação.

As atividades epileptiformes não sinápticas (AENS) deflagradas no giro dentado (GD)
de hipocampo de ratos possuem características similares aos registros de crises
epilépticas encontrados em humanos com quadros de esclerose hipocampal.
Considerando a importância das AENS para compreensão da origem e sustentação
de crises epilépticas, utilizar a bioprospecção na busca por moléculas
antiepileptogênicas com potencial inibição dessas atividades se mostra uma
estratégia promissora. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os
efeitos de indoalquilaminas isoladas do veneno do sapo Rhinella schneideri e da
serotonina sobre AENS, utilizando fatias hipocampais de ratos Wistar. As AENS foram
induzidas utilizando o modelo de zero concentração extracelular de cálcio e alta
concentração de potássio (8 mM). Posteriormente, foram adicionadas as
indoalquilaminas provenientes da preparação em Sep-Pack C-18 (S-20) e da
purificação em HPLC (Bufotenina e Dehidrobufotenina), além de diferentes
concentrações de serotonina (12,5 M, 25 M, 100 M, 200 M e 400 M). Programas
desenvolvidos em plataforma MATLAB possibilitaram o registro do potencial elétrico
extracelular no giro dentado e os parâmetros duração dos eventos, intervalo entre
eventos, amplitude máxima dos population spikes e componente DC foram quantificados. Entre os compostos avaliados, a fração S-20 mostrou-se especialmente eficaz na inibição de eventos ictais, resultando em um bloqueio parcial das AENS. Por outro lado, os compostos isolados da fração, bufotenina e dehidrobufotenina, apesar de serem seus principais constituintes, não apresentaram efeito estatisticamente significativo, limitando-se a um leve aumento do período interictal. A serotonina, assim como S-20, mostrou-se eficaz em prolongar significativamente o período interictal e reduzir a frequência dos eventos ictais, sendo observada inclusive a completa
supressão das AENS em alguns registros com 400 uM, Esses achados sugerem que
o efeito mais robusto da fração S-20 pode ser atribuído a interações sinérgicas entre
diversas indoalquilaminas já relatadas, enquanto a serotonina, além de seu papel
amplamente conhecido em mecanismos sinápticos, mostrou potencial
iv antiepileptogênico significativo em mecanismos não sinápticos. Este efeito parece
estar relacionado à modulação de canais iônicos, como os canais HCN e GIRK, os
quais influenciam diretamente a excitabilidade neuronal. Embora a relação entre
serotonina e epilepsia tenha sido investigada há décadas, este trabalho é pioneiro ao
explorar sua atuação em eventos induzidos na ausência de sinapse químicas. Assim,
indoalquilaminas como as aqui avaliadas podem representar ferramentas promissoras
para ampliar a compreensão sobre as crises epilépticas e contribuir para o
desenvolvimento de novos alvos e abordagens terapêuticas.

TERMO DE CONFIDENCIALIDADE PARA DEFESA FECHADA

O ataque de ácaros tem se intensificado em diversas culturas agrícolas, inclusive, na soja. As plantas possuem defesas constitutivas e induzidas para as auxiliarem a reduzir a pressão de artrópodes filófagos. Certos microrganismos do solo têm sido estudados pelo potencial de ajudar na disponibilidade de nutrientes e podem fortalecer as defesas das plantas contra herbivoria. Nutrientes como fósforo e nitrogênio podem tornar-se indisponíveis às plantas devido à fixação no solo ou perdas por processos como lixiviação e volatilização. O uso de bioinoculantes com bactérias solubilizadoras de fosfato e fixadoras de nitrogênio surge como estratégia eficiente para reduzir essas limitações e melhorar a nutrição vegetal.Contudo, não é sabido se o uso destes bioprodutos impactam no desenvolvimento de organismos fitófagos bem como nas defesas induzidas acionadas pelas plantas após o ataque. Assim, o presente trabalho objetivou avaliar se aplicação de bioinoculantes afetam populações do ácaro-rajado Tetranychus urticae (Acari: Tetranychidae) e o forrageamento do ácaro predador Neoseiulus californicus (Acari: Phytoseiidae) na cultura da soja. A hipótese nula é que plantas de soja inoculadas não interferem no fitófago T.urticae e no forrageamento do predador N. californicus. As plantas de soja cultivadas em vasos de 1,5 L de substrato foram submetidas aos seguintes tratamentos: (I) BRM 119 (Priestia megaterium) e BRM 2084 (Bacillus subtilis) (II) BRM 119 (P. megaterium) e BRM 2084 (Bacillus subtilis) + Bradyrhizobium, (III) Azospirillum, (IV) Azospirillum + BRM 119 (P. megaterium) e BRM 2084 (Bacillus subtilis), (V) controle, sem inoculação com a aplicação de 0,37 gramas de NPK e (VI) controle, com 0,75 gramas de NPK (10:10:10). Após 30 dias de cultivo em casa-de-vegetação, foram analisados os seguintes parâmetros: análises fisiológicas de teor de clorofila a, fluorômetro, área foliar, WinRhizo e análises biológicas da coorte dos ácaros, desenvolvimento, bioensaios em arena e olfatômetro. Como resultados, observou-se que as inoculações à base de bactérias promotoras de crescimento (BPCs) em plantas de soja aumentaram populações do ácaro-rajado, reduziram o tempo de desenvolvimento e aumentaram a oviposição nos bioensaios de tabela de vida. As plantas que receberam inoculações também foram preferidas no bioensaio em arena por T. urticae. Entretanto, as inoculações não interferiram na preferência por plantas de soja atacadas por T. urticae pelo ácaro predador N. californicus. As análises fisiológicas revelaram que as plantas inoculadas obtiveram maior estabilidade e eficiência do aparato fotossintético e apresentaram maior desenvolvimento. Conclui-se que o uso de bioinoculantes apesar de aumentar o desempenho fisiológico das plantas de soja, pode levar ao aumento da população do ácaro-rajado eno entanto sem interferirsem interferir na atratividade do predador Neoseiulus californicus.

Em condições normais, o giro dentado funciona como um portão fechado, impedindo que as crises cheguem ao Corno de Ammon. Porém em situações patológicas, o giro pode perder esse papel protetor, reverberando as crises, num processo conhecido como ativação máxima dentada (AMD). Em experimentos eletrofisiológicos, a AMD é conseguida espontaneamente pelo uso de soluções com 0mM Ca2+ e altas concentrações de K+ mas, até o presente momento, atividades desse tipo não haviam sido relatado na presença de 2mM Ca2+. Sendo assim, o objetivo principal deste trabalho é descobrir os mecanismos envolvidos na supressão das atividades epileptiformes sinápticas (AES) na região do Giro Dentado em fatias intactas e resseccionadas de ratos Wistar. Para tal, foi feito a ressecção das regiões do CA e da lâmina IP concomitante com uso de bloqueadores de canais GIRK, de receptores GABAérgicos e alterações na concentração de potássio extracelular. Diminuição nas concentrações de potássio não foram capazes de desencadear atividades epileptiformes sinápticas, bem como o uso dos bloqueadores de receptores GABAA e GABAB também não. Ao promovermos o bloqueio dos canais GIRK com o uso de bário, as atividades epileptiformes sinápticas foram evocadas. Sendo assim, esse trabalho mostra que o giro dentado apresenta como principal mecanismo de inibição das atividades epileptiformes sinápticas os canais retificadores de influxo do potássio acoplados a proteína G.

O milho é altamente produzido em regiões do mundo todo, cujo cultivo em solos ácidos causa perdas significativas de produtividade. Nesses solos, formas iônicas de alumínio (Al) limitam o desenvolvimento do sistema radicular, prejudicando a absorção de água e nutrientes minerais. No presente trabalho, uma nova população de 280 indivíduos F2 derivados do cruzamento entre L228-3 (linhagem moderadamente tolerante ao Al) x L53 (linhagem sensível ao Al) foi usada para mapear regiões genômicas associadas à tolerância ao Al. Os indivíduos F2 foram fenotipados para tolerância ao Al em hidroponia com base na inibição do crescimento radicular pelo Al e genotipados com marcadores SNP (Single Nucleotide Polymorphisms) e com o marcador alelo-específico para o gene ZmMATE1. O mapa genético foi composto por 477 marcadores mendelianos, cobrindo 1152,95 cM ao longo dos 10 cromossomos do milho. O mapeamento por intervalos múltiplos detectou cinco regiões genômicas 1, 5, 6, 7 e 9 e três interações epistáticas nos cromossomos, explicando 47,8% da tolerância ao Al. O QTL de maior efeito (qALT6) foi mapeado no cromossomo 6, estando co-localizado com o gene ZmMATE1 e explicando 24,9% da tolerância ao Al. O padrão de expressão confirmou que o gene ZmMATE1 foi induzido pelo Al no ápice radicular da linhagem L228-3, de forma semelhante ao observado na linhagem Cateto Al237. No entanto, a presença de apenas uma cópia do ZmMATE1 na L228-3 diferiu das três cópias deste gene na Cateto Al237, sugerindo que L228-3 possui um novo alelo do ZmMATE1, que confere tolerância ao Al no milho. O segundo QTL, em termos de efeito, foi mapeado no cromossomo 9 (qALT9), explicou 7,5% da tolerância ao Al e apresentou interação epistática com qALT6. Nesta região genômica foram encontrados genes que codificam fatores de transcrição do tipo MYB, NAC e WRKY. Dentre esses genes candidatos apenas o fator de transcrição MYB foi induzido pelo Al após uma hora de exposição ao Al na linhagem L53. Esse resultado, juntamente com o sinal do efeito na tolerância e com evidências in sílico da presença de um sítio de ligação para o MYB na região promotora do gene ZmMATE1, sugere que o fator de transcrição da família MYB atue no controle da expressão do gene ZmMATE1, embora ainda sejam necessários estudos funcionais para validar sua função. Assim, os resultados apresentam novos genes e alelos envolvidos na tolerância ao alumínio em milho.

O desenvolvimento do sistema radicular do sorgo é comprometido quando exposto
ao alumínio iônico (Al3+) nos solos ácidos (pH < 5), acarretando uma menor
absorção de água e nutrientes e, consequentemente, causando perdas na
produtividade das culturas. A liberação radicular de ácidos orgânicos, que formam
complexos não tóxicos com o Al, é o principal mecanismo fisiológico de tolerância ao
Al em plantas. Nas células do ápice radicular, esse mecanismo é mediado por
transportadores de malato e citrato pertencentes às famílias aluminum-activated
malate transporter (ALMT) e multidrug and toxic compound extrussion (MATE),
respectivamente, cuja expressão é regulada por fatores de transcrição (FTs). Em
sua maioria, os FTs envolvidos na tolerância ao Al pertencem às famílias “dedo de
zinco” e WRKY. O FT AtSTOP1 (sensitive to proton rhizotoxicity 1) controla, em
Arabidopsis, a expressão do gene AtALMT1, que é o principal gene de tolerância ao
Al nessa espécie, bem como o gene AtMATE. Em sorgo, a tolerância ao Al é
condicionada pelo gene SbMATE, que é controlado transcricionalmene pelos FTs,
SbWKRY1 e SbZNF1. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o efeito do fator de
transcrição de sorgo, SbWRKY1, na tolerância ao alumínio em Arabidopsis thaliana,
de forma a elucidar as vias de sinalização controladas por SbWRKY1. Para isso,
foram realizadas análises de tolerância ao Al e análises de expressão para os
principais genes de tolerância ao Al em Arabidopsis. Plantas transgênicas nas quais
a expressão dos genes AtSTOP1, e AtMATE foi perturbada pela inserção de T-DNA,
bem como o duplo mutante AtMATE/AtALMT1 foram transformadas geneticamente
com o gene SbWRKY1. Como esperado, a perturbação dos genes de tolerância ao
Al levou a uma redução da tolerância ao Al nos estoques mutantes. Em geral,
observou-se uma complementação do fenótipo para tolerância ao Al (medido via
crescimento relativo da raiz seminal em solução contento Al3+) nos eventos
transformados com SbWKRY1, em todos os backgrounds genéticos mutantes. A
partir das análises de expressão gênica e de tolerância, conclui-se que o gene
SbWRKY1 aumenta a tolerância ao alumínio em Arabidopsis, atuando em uma via
alternativa àquela controlada pelos genes AtMATE ou AtALMT1. Essa via
alternativa, ainda desconhecida, pode ser coincidente parcialmente com vias
8 reguladas por AtSTOP1, uma vez que o SbWRKY1 complementa o fenótipo de
sensibilidade ao alumínio no mutante AtSTOP1-KO. Dada a existência de alvos
alternativos de AtSTOP1, esse trabalh0 indica que há potencial para aumento da
tolerância ao Al pela combinação de mecanismos distintos de tolerância ao Al

Procedimentos invasivos dolorosos frequentemente são realizados em recémnascidos
admitidos nas unidades de terapia intensiva (UTI). Os efeitos agudos e os
de longo prazo causados por estes estímulos podem ser investigados em modelos
animais. Estudos anteriores têm demonstrado que animais submetidos a estímulo
nociceptivo no período neonatal apresentam alterações comportamentais tais como
sinais de ansiedade ou depressão, além de um aumento na taxa de neurogênese e
ativação celular no giro denteado hipocampal. Diante deste cenário, o presente estudo
verificou os efeitos da dor persistente desencadeada por estímulo inflamatório crônico
em ratos no 1º (P1) ou 8º (P8) dia de vida, por meio do tratamento com Complete
Freud Adjuvant (CFA) na indução e registro de long-term potentiation (LTP) em fatias
de animais em fase adulta. Foram avaliados os parâmetros amplitude e slope do
potencial pós-sináptico excitatório (PEPS), na camada granular e molecular do giro
dentado. Analisando os experimentos da camada granular controle, tratado P1 e P8
isoladamente, houve diferença significativa entre eles antes e após o estímulo theta
burst (TBS). Porém, comparando-se os experimentos camada granular controle, P1 e
P8 em intervalos de tempos específicos após o TBS, não foram observadas diferenças
significativas entre as três condições, tanto para a amplitude quanto para o slope do
PEPS. Analisando os experimentos da camada molecular tratado P1 isoladamente,
houve diferença significativa antes e após o estimulo theta burst (TBS). Entretanto,
comparando-se os experimentos camada granular tratado P1 e camada molecular
tratado P1, não foram observadas diferenças significativas entre as duas condições,
tanto para amplitude quanto para o slope do PEPS.

Aspectos Bioecológicos de Melanaphis sorghi (Theobald, 1904) (Hemiptera:Aphididae) na Cultura do Sorgo

O uso de bioinoculantes está alinhado com os princípios de intensificação
ecológica da agricultura. No entanto, é fundamental entender como esses
bioinoculantes afetam as plantas e como influenciam a microbiota do solo em
diferentes condições de fertilização. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de
um bioinoculante composto por duas estirpes de bactérias solubilizadoras de fosfato
(Bacillus subtillis e Priestia megaterium) na produtividade, arquitetura radicular e
microbioma da rizosfera de milho em solo argiloso. Um genótipo de milho foi cultivado
no campo experimental da Embrapa Milho e Sorgo por duas safras, com e sem
inoculação, com superfosfato triplo (STP) ou fosfato de rocha reativo nas doses de 0,
60, 120 e 240 kg de P2O5 ha-1. Durante a fase de florescimento, foi avaliada a
arquitetura do sistema radicular e a diversidade genética por Polimorfismo de
Comprimento de Fragmento de Restrição Terminal (T-RFLP). Ao final do ciclo, foram
avaliadas as caraterísticas agronômicas, a atividade enzimática das fosfatases ácida
e alcalina e macronutrientes. Os resultados mostraram que não houve diferença
significativa na produtividade dos grãos entre as duas safras e nem incremento para
os tratamentos com inoculação. Os valores de P resina, P total do solo, P foliar, N dos
grãos e altura das plantas apresentaram valores significativamente maiores na
primeira safra enquanto P e K dos grãos e diâmetro da espiga apresentaram valores
significativamente maiores na segunda safra. As características da arquitetura
radicular como área, largura e densidade de raízes a 90% de profundidade
apresentaram maiores valores na primeira safra e o ângulo da raiz apresentou maior
valor na segunda safra. Os índices de diversidade da comunidade microbiana da
rizosfera de milho foram maiores na primeira safra. As famílias bacterianas mais
abundantes nas duas safras foram Streptomycetaceae, Micrococcaceae,
Methylobacteriaceae e Bradyrhizobiaceae e as famílias fúngicas mais abundantes
ix foram Saccharomycetaceae e Tremellaceae. A atividade enzimática da fosfatase
ácida foi maior que fosfatase alcalina nas duas safras. Além disso, a maior atividade
enzimática das fosfatases ácida e alcalina na segunda safra coincidiu com os maiores
índices pluviométricos. A Análise de Componentes Principais indicou que o tratamento
não inoculado e com dose 0 kg ha-1 do fertilizante STP apresentou maior produtividade
na segunda safra. A alta concentração de P no solo do campo experimental pode ter
contribuído para que o potencial produtivo tenha sido alcançado, não permitindo que
a adubação fosfatada e a inoculação tivessem efeitos na promoção de crescimento
das plantas de milho e que as diferenças entre as caraterísticas avaliadas tenham sido
melhor observadas entre safras do que entre os tratamentos. Portanto, a eficácia na
aplicação de fertilizantes e bioinoculantes está relacionada ao genótipo da planta, à
estirpe bacteriana inoculada, ao histórico de práticas de manejo do solo e aos fatores
ambientais.

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O uso de inoculantes empregando bactérias promotoras de crescimento de plantas na agricultura tem sido considerada uma forma eficaz e sustentável comparação aos fertilizantes químicos e defensivos agrícolas. Este trabalho teve como objetivo caracterizar as estirpes CMS2142 de Azospirillum brasilense e CMS1626 de A. argentinense e avaliar seu potencial em promover o crescimento vegetal. As duas cepas foram utilizadas em inoculações únicas e coinoculadas com o produto comercial BiomaPhos® formulado com Bacillus subtilis CNPMS B2084 e B. megaterium CNPMS B119. Os experimentos em condições de campo foram conduzidos com sete tratamentos, sendo três tratamentos únicos com as estirpes de individuais de Azospirillum sp. e BiomaPhos®, três coinoculações e uma testemunha negativa (não inoculada) em duas safras agrícolas (2019/2020 e 2020/2021) nas regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil. O delineamento experimental foi em blocos casualizados e três repetições. Os parâmetros avaliados foram produtividade de grãos, teor de nitrogênio (N), fósforo (P) e potássio (K) nos grãos, atividades enzimáticas de fosfatase ácida e alcalina, β- glicosidase e arissulfatase em solo rizosférico. Os resultados indicaram diferenças significativas para todas as variáveis analisadas dependendo do ano e da região. O milho inoculado com a estirpe CMS1626 de Azospirillum argentinense resultou em maior produtividade de grãos em 100% dos casos analisados. Em geral, essa estirpe respondeu melhor quando coinoculada com Bacillus sp. Foi encontrada correlação positiva significativa entre produtividade e teor de nutrientes. Da mesma forma, para atributos biológicos, foram detectadas diferenças significativas entre os tratamentos para as enzimas testadas. Além disso, os genomas de ambas as cepas de Azospirillum foram sequenciados na plataforma Illumina HiSeq 4000 do Beijing Genomics Institute - BGI, utilizando a estratégia 150 paired-end. O tamanho total dos genomas variou entre 6,9 e 7,7 milhões de pares de bases (pb). O teor de GC foi de 68,43% para A. argentinense (CMS1626) e 68,59% para A. brasilense (CMS2142). A análise parcial do genoma mostrou a presença de genes envolvidos na formação de cistos, quimiotaxia, motilidade, competição na rizosfera e mecanismos de promoção do crescimento vegetal. Ambas as cepas fixaram nitrogênio e produziram biofilme e sideróforos in vitro. A estirpe CMS1626 produziu mais fosfatases e AIA e solubilizou mais fosfato, enquanto a cepa CMS2142 foi caracterizada como tolerante à salinidade. As características promotoras de crescimento avaliadas in vitro foram corroboradas pela análise genômica mostrando genes envolvidos em diferentes vias metabólicas. Pode-se concluir que o potencial da simples inoculação e coinoculação de cepas de Azospirillum e Bacillus em culturas de milho e a caracterização genômica dos mecanismos de promoção de crescimento destacaram a compreensão da interação planta-bactéria e demonstraram o potencial de ambas as cepas na formulação de novos inoculantes para uma produção agrícola mais sustentável.

A produção de milho enfrenta várias doenças que causam contaminação e são perigosas para saúde,
diminuindo o rendimento e o lucro. Assim, o melhoramento de plantas é um dos métodos mais
eficazes e ambientalmente seguros para controlar infecções fúngicas e aumentar a resistência à
incidência de fumonisina. No entanto, o melhoramento convencional pode ser dificultado pela
complexa arquitetura genética de resistência à fumonisina e seleção assistida por marcadores são
propostas como alternativas eficientes. O objetivo deste estudo consiste em identificar regiões

genômicas e genes candidatos associados à menor incidência de fumonisinas em grãos de híbridos-
simples de milho. Um painel de 335 linhagens endogâmicas de milho foi avaliado nos ensaios

intermediários e elites do programa de melhoramento de milho da Embrapa Milho e Sorgo, em três
anos consecutivos. A determinação de fumonisina foi realizada na Embrapa Milho e Sorgo. As
linhagens foram genotipadas por sequenciamento (GBS), gerando 374667SNPs polimórficos de
alta qualidade. Foram encontrados trinta e dois SNPs possivelmente associados à resistência a
incidência de fumonisina no milho. Com base nos SNPs identificados nas análises associativas,
serão buscados genes candidatos com possível efeito na incidência de fumonisinas em grãos de
milho, as regiões genômicas e os genes candidatos. Os resultados obtidos serão comparados com
estudos já realizados pelo grupo da Embrapa Milho e Sorgo.

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Mundialmente, o sorgo é utilizado para diversas finalidades sendo que, no Brasil, a maior parte da produção é destinada para alimentação animal. No entanto, uma parte da produção de sorgo também pode ser empregada para a geração de energia e, nesse cenário, destacam-se os tipos de sorgo sacarino e biomassa que podem ser alternativas eficientes para a produção de vapor para industrialização, cogeração de eletricidade ou produção de etanol de primeira e segunda geração. Estudos com sorgo bioenergia têm demonstrado ampla variabilidade genética para características relacionadas à produção de biomassa, ao acúmulo de açúcares no colmo e à sensibilidade ao fotoperíodo, enfatizando a importância do melhoramento genético para a obtenção de novas linhagens e cultivares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a diversidade genética de linhagens de sorgo com base em marcadores SNP com ampla cobertura do genoma, a fim de auxiliar na seleção de linhagens com características favoráveis para a geração de bioenergia. Para isso, foram utilizadas 564 linhagens de sorgo de um painel pertencente a Embrapa Milho e Sorgo, as quais foram genotipadas por sequenciamento (GBS, do inglês Genotyping by Sequencing), gerando um total de 325.197 marcadores SNP. Após a filtragem dos dados para MAF (do inglês, Minor Alelle Frequency) superior a 0,05 e mínimo de 20% de dados perdidos, foram obtidos 9.823 marcadores SNP, os quais foram utilizados para a construção da matriz de dissimilaridade via IBS (do inglês, Identity by State), cujos valores variaram de 0,003 a 0,42. Com base nessa matriz de dissimilaridade foi realizada a análise de agrupamento através do método NeighborJoining, resultando na identificação de quatro grupos de diversidade (G1, G2, G3 e G4). As características analisadas para observar a composição de cada grupo de diversidade foram: a origem da linhagem (Brasil/Embrapa, Índia e Estados Unidos), tipo de sorgo (biomassa, sacarino, granífero e forrageiro), tipos de colmo (seco e suculento) e fotoperíodo (sensível e insensível). O grupo G1 teve uma tendência de agrupar uma maior proporção de linhagens do Programa de Melhoramento da vi Embrapa (Brasil, 85,71%), com maior número de linhagens com colmo suculento (72,73%); o grupo G2 apresentou maior diversidade, representando vários tipos de sorgo, com 52,56% oriundos da Embrapa; o grupo G3 em grande maioria foi composto por sorgo do tipo sacarino (85,2%), com 86,36% de linhagens da Embrapa e 84,66% com colmo suculento; e o grupo G4 foi composto por 67,1% de linhagens de sorgo do tipo biomassa, 70,97% de linhagens oriundas da Índia, com a maioria dessas linhagens sensíveis ao fotoperíodo (79,4 %). Observou-se alta variabilidade genética entre os grupos de diversidade, sendo possível o direcionamento de cruzamentos para o desenvolvimento de novos híbridos com características de interesse para geração de bioenergia. Houve uma tendência de organização dos agrupamentos com base na origem das linhagens, onde buscou-se relacionar com as características de interesse para geração de energia. Para a produção de biocombustíveis, é interessante o cruzamento entre linhagens de sorgo sacarino e biomassa, por possuírem características complementares que podem ser destaque para o melhoramento de sorgo bioenergia

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A população mundial tem crescido de maneiras sem precedentes e junto a isso, a
demanda por produzir alimentos saudáveis e baratos de maneira sustentável e
lucrativa. O sistema de Integração Lavoura-Pecuária-Floresta (ILPF) tem se
mostrado como alternativa sustentável de uso do solo e conservação dos recursos
naturais. Esta estratégia de cultivo agrega em uma única área diferentes sistemas
produtivos, como madeira, grãos, carne e leite, possibilitando a máxima utilização da
área. O conhecimento da diversidade da ecologia microbiana do solo e sua atividade
sob ILPF tornam-se de fundamental importância para avaliar a estabilidade destes
sistemas. Este trabalho objetivou avaliar as alterações na qualidade do solo de
Cerrado sob ILPF envolvendo diferentes arranjos estruturais de eucalipto e
pastagem, de duas áreas experimentais na região central de Minas Gerais
(EMBRAPA Milho e Sorgo e Fazenda Santa Rita – EPAMIG). Foram monitorados os
teores de COT, CL e RBS, além das atividades das enzimas arginase, urease,
fosfatase ácida e alcalina, β-glicosidase e Arilsulfatase, em amostras de solo que
foram coletadas na EPAMIG em três arranjos de ILPF (renques de 9 m com linhas
simples e duplas de eucalipto, e 20 m com linhas duplas de eucalipto) plantado em
2008 (1 m de distância do tronco do eucalipto e no centro do renque), e usando
áreas de pastagem a pleno sol, eucalipto GG100 (3x3) e Cerrado nativo como
controle. O delineamento experimental foi blocos casualizados em parcelas
subdivididas, com três repetições. Já na área experimental da EMBRAPA, amostras
de solo também foram coletadas em três arranjos de ILPF (renques de E. urophylla
cv. GG100 implantados em 2009, 2011 e 2013). O delineamento experimental foi
blocos casualizados em parcelas sub-subdivididas, com três repetições. Em cada
repetição, foram retiradas amostras, compostas de cinco subamostras, na
profundidade de 0-10, 10-30, 30-60 e 60-100 cm e 0-10, 10-20, 20-40 e 40-60 cm

VIII

para EPAMIG e EMBRAPA, respectivamente). Como resultados, houve influência
significativa (p<0,05) do fator época de amostragem sobre todos os parâmetros
avaliados, sendo que, de maneira geral, a atividade microbiana mais elevada foi
observada em março/2019, época com maior índice de precipitação. Os valores de
média para CL aumentaram em função da presença de água no sistema; RBS com
valores aumentados em função do tempo de implantação do sistema ILPF; atividade
da enzima β-Glicosidase corroborou os resultados encontrados para CL na mesma
época de avaliação. Concluiu-se que o uso dos bioindicadores utilizados permitiu
detectar alterações na qualidade biológica do solo do bioma Cerrado sob diferentes
arranjos de ILPF, demonstrando que há aumento da qualidade do solo ao longo do
tempo de implantação do sistema.

xxx

Os pacientes portadores de epilepsia do lobo temporal apresentam refratariedade
medicamentosa, o que torna necessário a investigação de novas vias e abordagens
terapêuticas, como o envolvimento de fatores não sinápticos e a participação do
sistema tonina angiotensina nas crises epilépticas. A enzima tonina permite a
conversão direta de angiotensinogênio em angiotensina II, esta última, em nível
cerebral, favorece a ocorrência de crises. Com isso, o trabalho teve como objetivo
caracterizar as atividades epileptiformes não sinápticas no camundongo transgênico
que expressa tonina de rato TGM(rTon) e em seu controle C57bl6. Assim, após a
identificação da presença do transgene para tonina por meio da genotipagem, foi feito
o registro eletrofisiológico em fatias hipocampais dos camundongos por meio do
protocolo de indução de atividades não sinápticas. Os parâmetros eletrofisiólogicos
mostraram que os animais TGM(rTon) apresentaram tempo de latência e intervalo
entre os eventos menores e duração dos eventos maior quando comparados aos
controles. A amplitude máxima dos populations spykes foi maior no TGM(rTon) e a
média dos populations spykes menor em relação ao controle. Os resultados obtidos
sugerem que os animais TGM(rTon) são mais susceptíveis às crises epileptiformes in
vitro não sinápticas. Uma das justificativas seria a participação do sistema tonina-angiotensina pela liberação de Angiotensina (Ang II) pela inibição de canais para
potássio ativados por voltagem tipo IA em 50%, o que leva ao aumento da
excitabilidade. Outra hipótese seria a atuação de conexinas promovendo uma
regulação positiva para crises convulsivas, em particular a conexina 43.

A procura por utilizar material lignocelulósico vem aumentando constantemente. Alguns microrganismos conseguem converter os açúcares presentes nesse material transformando em etanol e xilitol. As enzimas hidrolíticas apresentam papel importante em diversos processos de interesses
biotecnológicos. Dentre esses processos, o uso de biomassa para produção de
biocombustíveis e xilitol, como alternativa às fontes não renováveis, tem
despertado grande interesse em virtude das mudanças climáticas. O objetivo
deste trabalho foi avaliar e selecionar leveduras produtoras das enzimas
hidrolíticas amilase, celulase e xilanase, com potencial para produção de etanol
e xilitol. A seleção das linhagens de levedura foi determinada através do
crescimento em meios de cultura com diferentes fontes de carbono (amido
solúvel, carboximetilcelulose - CMC e xilana), em triplicata. A avaliação da
atividade enzimática foi realizada por meio do índice enzimático (IEA), e através
da quantificação de enzimas por fermentação em meio líquido para as enzimas amilase, celulase (CMCase e Fpase) e xilanase. Após a quantificação em meio líquido foi selecionado as melhores linhagens com resultados de produção de enzimas, para realizar a fermentação em meio contendo xilose como única fonte de carbono. As linhagens 3.22 Meyerozyma guilliermondii e 3.26
Torulaspora conseguiram produzir as três enzimas analisadas. No total, foram
delbrueckii, selecionadas sete linhagens com capacidade para fermentar glicose à etanol
para fermentar o meio contendo xilose, dentre elas: 3.6, 4.8, 3.22, 3.26, 4.16,
4.10 e 4.5. Seis linhagens conseguiram assimilar a xilose produzindo o xilitol. A
linhagem que produziu maior quantidade de xilitol foi a 3.6 Wickerhamomyces .L- 1,
anomalus, com produção de 7,666 g com fator de conversão de xilose em .g-1)
.L-1.h-1). xilitol de Yp/s= 0,481 (g e a produtividade Qp= 10,221 (g
Foi videntificada uma nova linhagem capaz de fermentar a xilose em xilitol, sendo da
espécie Torulaspora delbrueckii

Fungos entomopatogênicos são micro-organismos patógenos de insetos e simbiontes
em plantas, com diversas interações ecológicas. Os fungos UFMG 11444 e UFMG
11443 foram isolados de Mahanarva spectabilis em um sistema silvipastoril e
apresentaram potencial para serem utilizados em controle biológico de pragas. Os
conídios destes fungos foram produzidos em uma mistura de 1:1 de farinha de milho
1012 e de arroz e obteve-se lotes com 1 x conídios/g. Os fungos UFMG 11444 e UFMG
11443 cresceram mais de 80% quando expostos a 40°C e abaixo de 35º C germinaram mais de 92% dos conídios. Com menos de 45 minutos de exposição à
radiação solar, tanto o fungo UFMG 11443 e 11444 germinaram mais de 80%. Estes,
inoculados via tratamento de sementes, pulverização foliar e nas raízes pela rega de
plantas jovens com as suspensões fúngicas, colonizaram mais de 60% das amostras
induzindo a endofitia, promoveram ganho de biomassa e não apresentaram sinais de
fitopatogenia em plantas como Glycine max, Oryza sativa, Zea mays, Triticum
aestivum, Phaseolus vulgaris. Em Urochloa brizantha nas condições de casa de
vegetação, testando os fungos UFMG 11444 e UFMG 11443, as técnicas de
inoculação via tratamento de sementes ou via foliar foram significativamente
diferentes entre estes. A partir do 10° dia após a exposição, nas plantas inoculadas
na via foliar, 100% das M. spectabilis foram infectadas. Na inoculação endofitica via
sementes os fungos causaram epizootia de mais de 88% após o 10º dia. Os fungos não causaram fitopatogenia, colonizaram as plantas e não foi observado diferenças
significativas no ganho de biomassa. Em Brassica oleracea, objetivando o controle de
Plutella xylostella e Brevicoryne brassicae na inoculação via semente, folha e raiz,
além dos fungos UFMG 11444 e UFMG 11443 foi usada uma linhagem comercial de
Metarhizium anisopliae para servir de parâmetro de infecção. Foi relatado 100% de
eficiência no controle Brevicoryne brassicae após 15 dias de exposição às plantas.
Nos testes com Plutella xylostella não foi usada a inoculação via foliar, por aspersão.
Nas inoculações via semente e raiz 100% dos insetos morreram, a partir do 10° dia
de exposição às plantas. Mais de 60% das plantas de B. oleracea foram colonizadas
pelos fungos UFMG 11444 e UFMG 11443 e apresentaram ganho de biomassa e nenhuma evidenciou sintomas de fitopatogenia. Em testes a campo em pastagens de
ha-1, U. brizantha visando controlar M. spectabilis foram pulverizadas doses de 0,5 kg
ha -1 ha -1  ha-1 1,0 kg e 2, kg dos fungos UFMG 11443 e 11444. A dose de 0,5 kg
de ambos os fungos não foi significativamente diferente das outras doses de 1,0 e 2,0 kg
ha -1, destacando-se das demais por possuir menor volume e podendo levar a um
menor custo ao produtor. Não foram observadas diferenças significativas entre os
fungos com 6 e 10 dias após a inoculação a campo, demonstrando que ambos tem
potencial para controlar a população de M. spectabilis. Concluiu-se que o uso destes
fungos na via endofítica tendo plantas como vetores, tem ppotencial para serem
candidatos a bioprodutos para controle biológico de pragas.

xxx

            Crises epilépticas intensas estão associadas a uma diminuição importante da concentração de ATP.  Essas alterações são apontadas como causa de sequelas clínicas. Contudo, ainda não está elucidado todo o processo envolvido no curso das crises. Estudos têm sido concentrados na avaliação das condições metabólicas necessárias à ocorrência de atividades epileptiformes. Diante da importância da glicose na manutenção dos níveis ideais de ATP, portanto atuando diretamente sobre os níveis metabólicos neuronais, e considerando que as crises epilépticas intensas são sustentas na ausência de conexões sinápticas, o presente trabalho tem com objetivo investigar os efeitos da hipoglicemia sobre crises epilépticas. Foram realizados experimentos de indução de atividades epileptiformes não-sinápticas em fatias de hipocampo cerebral de rato wistar. Os resultados mostram supressão das atividades epileptiformes não-sinápticas durante manobras de hipoglicemia. Durante essas manobras, uma série de testes buscou identificar os possíveis mecanismos responsáveis pela supressão. Os resultandos sugerem que a supressão das atividades induzidas pela hipoglicemia se deve a um bloqueio por despolarização.

O Brasil possui aproximadamente 180 milhões de hectares de pastagens, sendo
que 85% das forrageiras são do gênero Urochloa Urochloa (sin. Urochloa), pela sua
alta adaptabilidade às diferentes condições edafoclimáticas. Essas plantas
representam também parte essencial nos sistemas integrados de produção agrícola.
Porém,
cerca
de
70%
dessas
áreas
encontram-se
degradadas
devido,
principalmente, ao manejo inadequado, em particular relacionado à adubação
nitrogenada. Uma das alternativas para o suprimento deste nutriente em
substituição/complementação de fertilizantes nitrogenados consiste no uso de
bactérias diazotróficas, as quais realizam a fixação biológica de N2 (FBN). Diante
desse contexto, objetivou-se; (i) isolar, caracterizar e pré-selecionar bactérias
diazotróficas e não diazotróficas, visando à inoculação de forrageiras, e, (ii) avaliar a
promoção de crescimento em plantas de Urochloa brizantha cv. Marandu
submetidas à inoculação com estirpes de bactérias pré-selecionadas. Para o
isolamento utilizando-se amostras obtidas a partir de solo rizosférico, raiz e colmo
(endofítico) de cinco genótipos de gramíneas forrageiras e meio de culturas semi
sólido
definido para Azospirillum spp. Obtiveram-se 156 isolados de bactérias (53%
da raiz, 30% do solo rizosférico e 17% colmo) que foram incorporados à Coleção de
Microrganismos Multifuncionais da Embrapa Milho e Sorgo. Com base em
características fenotípicas e promoção de crescimento através da produção de
ácido indolacético (AIA) e solubilização de fosfato, foram pré-selecionados 37
isolados, esses foram testados quanto à produção de amônio e atividade da enzima
ACC deaminase (ACCd). Dentre esses, 30 isolados foram testados em relação à
caracterização molecular, afiliação filogenética e quanto à promoção de crescimento
e incorporação de nitrogênio em plantas de U. brizantha cv. Marandu. Como resultados, observou-se que, 75% foram classificadas como diazotróficas, 99,36%
como produtores de AIA, 12,82% solubilizadores de fósforo, 100% produtoras de
amônio e 84% com atividade de ACCd. As análises das sequências da subunidade 16S rDNA dos isolados bacterianos mostraram alta diversidade genética entre
isolados, sendo, 50% identificados como Azospirillum spp., 23% Bacillus spp., 7%
Enterobacter, 3% Microbacterium, 7% Serratia , 3% do gênero Stenotrophomonas e
7% dos isolados não foram identificados. Em relação à promoção de crescimento de
da cultivar Marandu observou-se após 90 dias de cultivo em casa de vegetação,
variação significativa em função das estirpes para todas as variavéis testadas: peso
seco da parte aérea (PSPA); peso seco da raiz (PSR); peso verde total (PVT); peso
seco total (PST); relação raiz/parte aérea; teores de N na parte aérea. Os resultados
permitiram a seleção de estirpes promissoras como candidatas à formulação de
inoculantes específicos para gramíneas forrageiras.

O uso de plantas companheiras na cultura pode aumentar a presença de inimigos
naturais e indiretamente mediar o controle populacional de insetos-praga. Essas
plantas também podem exercer um efeito repelente direto sobre insetos indesejáveis. Este estudo discriminou esses mecanismos do manjericão (Ocimum basilicum) em reduzir o ataque de Brevycorine brassicae a plantas vizinhas de Brassica oleraceae. Em campo, o manjericão aumentou a abundância de
predadores de pulgões e diminuiu a de B. brassicae em plantas adjacentes.
Experimentos controlados mostraram que o manjericão repele ou confunde a
oviposição de Plutella xylsotella e a escolha da planta por B. brassicae. Seu efeito
repelente, na ausência de inimigos naturais, gerou um padrão populacional de B.
brassicae similar ao observado no campo. Um possível papel dos inimigos
naturais, intermediado pelo manjericão, não foi exclusivo em promover a redução
na abundância de B. brassicae. A repelência ou confundimento do herbívoro pela
planta companheira teve função evidente e primordial. O manjericão demonstrou
potencial para uso como planta companheira em cultivos de brássicas, uma vez
que foi capaz de amenizar o ataque de B. brassicae, seja por efeito indireto, via
aumento de predadores, ou direta e principalmente, por repelência.
O uso de plantas companheiras na cultura pode aumentar a presença de inimigos
naturais e indiretamente mediar o controle populacional de insetos-praga. Essas
plantas
também
podem
exercer
um
efeito
repelente
direto
sobre
insetos
indesejáveis. Este estudo discriminou esses mecanismos do manjericão (Ocimum
basilicum) em reduzir o ataque de Brevycorine brassicae a plantas vizinhas de
Brassica
oleraceae.
Em
campo,
o
manjericão
aumentou
a
abundância
de
predadores de pulgões e diminuiu a de B. brassicae em plantas adjacentes.
Experimentos controlados mostraram que o manjericão repele ou confunde a
oviposição de Plutella xylsotella e a escolha da planta por B. brassicae. Seu efeito
repelente, na ausência de inimigos naturais, gerou um padrão populacional de B.
brassicae similar ao observado no campo. Um possível papel dos inimigos
naturais, intermediado pelo manjericão, não foi exclusivo em promover a redução
na abundância de B. brassicae. A repelência ou confundimento do herbívoro pela
planta companheira teve função evidente e primordial. O manjericão demonstrou
potencial para uso como planta companheira em cultivos de brássicas, uma vez
que foi capaz de amenizar o ataque de B. brassicae, seja por efeito indireto, via
aumento de predadores, ou direta e principalmente, por repelência.

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O cloreto é o ânion fisiológico mais abundante e determina funções biológicas elementares. Seus níveis intracelulares resultam de um balanço estabelecido por canais, trocadores e transportadores presentes na membrana plasmática. Alterações no equilíbrio desse íon ocorrem em condições patológicas como a epilepsia, na qual o acúmulo de cloreto intracelular em neurônios do sistema nervoso central (SNC) é relacionado com a indução e sustentação de atividades epileptiformes. Disfunções nos cotransportadores cátion-cloreto (CCC`s) têm sido apontadas como os principais responsáveis por este acúmulo. Experimentos anteriores demonstraram que a perfusão com baixa concentração de cloreto extracelular ([Cl-]o) (7 mM) bloqueia reversivelmente descargas hiper-sincrônicas espontâneas induzidas por alta concentração de potássio ([K+]o) sem reduzir a hiperexcitabilidade sináptica e, ainda, que esse efeito anticonvulsivante é similar ao exercido pelo diurético furosemida e, portanto, mediado pelo efeito sobre os CCC`s, especialmente o NKCC1 e o KCC2. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho consistiu em investigar a depleção extracelular do íon cloreto bem como a influência dos seus mecanismos regulatórios nas atividades epileptiformes não sinápticas induzidas (AENS) em fatias hipocampais de ratos Wistar pelo modelo de zero cálcio [Ca2+] e alta [K+]o (8 mM)  por meio de registros eletrofisiológicos extracelulares no giro dentado, a fim de avaliar o efeito desses mecanismos sobre as AENS. Foram utilizadas, além do gluconato de sódio para a substituição equimolar do íon cloreto, as drogas furosemida (5 mM), bumetanida (12,5 μM), VU 0463271 (10 μM),  acetazolamida (100 μM) e amilorida (0,5 mM), isoladamente ou em combinação, totalizando dezoito grupos experimentais. Programas desenvolvidos em plataforma MATLAB possibilitaram o registro do potencial elétrico extracelular e os parâmetros duração dos eventos, intervalo entre eventos, amplitude dos population spikes, amplitude máxima e componente DC foram quantificados. A manobra de baixa [Cl-]o extracelular não ocasionou o bloqueio das atividades epileptiformes, efeito obtido durante a manobra com furosemida. De modo inverso, a redução da atividade dos CCC’s ocasionada pela manobra de baixa [Cl-]o promoveu um quadro de maior excitabilidade neuronal. Do mesmo modo, o bloqueio seletivo do NKCC1 com bumetanida, do KCC2 com VU 0463271 (VU) ou a adição simultânea de ambos os inibidores (bumetanida + VU) não ocasionou o bloqueio das AENS, demonstrando um efeito adicional da furosemida, que não é o efeito sobre os CCC`s. Partindo de dados na literatura de que o diurético também age sobre a anidrase carbônica e o trocador cloreto-bicarbonato independente de sódio (AE3), a próxima etapa experimental consistiu em investigar o efeito do diurético sobre o pH, mecanismos que também são influenciados pela concentração intracelular de cloreto. Para isso, a alteração do pH do meio extracelular foi analisada, com a manutenção do bloqueio dos mecanismos de cotransporte, com o uso de furosemida e baixa [Cl-]o. Tornando o pH da solução de indução mais básico, em torno de 7,55, observou-se o retorno das atividades epileptiformes, sendo possível evidenciar que o bloqueio exercido pela furosemida ocasiona a acidificação do meio extracelular. Após a elucidação da sua atividade sobre o pH, iniciou-se a investigação do efeito do bloqueio de mecanismos que atuam sobre o pH neuronal nas AENS, a fim de identificar o(s)




possível(is) alvo(s) do diurético e, consequentemente, os mecanismos que possibilitam a sustentação das atividades epileptiformes. No entanto, a utilização de acetazolamida (ACZM), inibidor da anidrase carbônica, ou demais manobras combinadas de inibição de CCC’s e mecanismos reguladores pH neuronal também foram avaliadas, como bumetanida + VU + ACZM e zero [Cl-]o + ACZM sem promover a supressão das atividades epileptiformes. A condição de zero [Cl-]o e zero [NaHCO3]o, no entanto, que mimetiza o bloqueio do AE3, diferentemente dos outros grupos, apresentou uma redução progressiva dos eventos epileptiformes, com tendência ao bloqueio. Dessa forma, o efeito adicional de um mecanismo regulador de pH ainda não investigado, o trocador Na+/H+ (NHE), também foi avaliado, uma vez que durante o período ictal, com o acúmulo de sódio intracelular, uma inversão de sua atuação, com a intrusão de um íon H+ e extrusão de um Na+ é sugerida. A combinação das manobras resultou no aparecimento de oscilações regulares na linha de base com posterior supressão das AENS. Em suma, foi possível observar que o bloqueio das AENS só foi possível devido à ação conjunta em diferentes mecanismos não sinápticos, no caso, cotransportadores cátion-cloreto e trocador NHE, o que também influenciaria na atividade da Na+/K+ ATPase. Ainda, o cotransportador sódio/bicarbonato (NBC) é um possível alvo do diurético, uma vez que mantém a alcalinidade do meio extracelular, e, consequentemente, a hiperexcitabilidade neuronal. No entanto, ainda não há um bloqueador específico para este mecanismo de transporte.

apresentaram o alelo superior do ZmMATE1, confirmando a existência de diferentes mecanismos de tolerância ao Al em milho. Assim, a ampla variabilidade genética e fenotípica apresentada no painel de linhagens tropicais de milho permitiu identificar novas combinações de alelos conferindo alta expressão do gene ZmMATE1, além de novos genes, que poderão ser piramidados visando o desenvolvimento de cultivares com níveis superiores de tolerância ao Al.

Sistemas de perfusão por gravidade têm fluxo dependente da diferença entre os níveis do reservatório de alimentação e o ponto de perfusão. Nos experimentos de eletrofisiologia em que tais sistemas são utilizados, é usual realizar, periodicamente, o ajuste do fluxo e a trocas de soluções de forma manual. Contudo, o manuseio de reguladores para controle do fluxo, e de válvulas manuais para troca de soluções durante a aquisição de sinais pode ocasionar interferências mecânicas e elétricas de diversas origens, prejudicando a relação sinal/ruído. No presente trabalho, descrevem-se os materiais e procedimentos utilizados na construção de um sistema de controle automático de fluxo com ajustes gradativos e de troca de soluções de perfusão em experimentos eletrofisiológicos com fatias de cérebro. E tem como objetivo, reduzir, o quanto possível, os artefatos oriundos dos procedimentos de fechamento e abertura de registros de cada solução utilizada. Foi desenvolvido um sensor ótico para a instrumentação de gotas e dois dispositivos atuadores de fluxo. O dispositivo de troca é constituído de válvulas solenoides e bombas para recircular a solução. Foi desenvolvido uma Interface Homem Máquina (IHC) para a interação do usuário com o sistema, e um microcontrolador Atmel2550 foi empregado como unidade controladora de todo conjunto. Todos dispositivos confeccionados foram testados em sistemas de registro eletrofisiológicos para a aquisição de sinais elétricos em fatias hipocampais por meio de câmara de interface. O sistema se mostrou uma ferramenta eficaz para a padronização dos experimentos, além disso, os resultados mostraram também a diminuição do erro de fluxo e atenuação das interferências nos procedimentos de trocas das soluções de perfusão.

A utilização de insumos sintéticos torna-se de fundamental importância para o potencial produtivo alcançado pela agricultura moderna. Todaviaaaplicação intensiva desteinsumo pode comprometer a sustentabilidade agrícola na dimensão ambiental. A prática da inoculação com produto biológico à base de bactérias que apresentam a capacidade de fixar nitrogênio tem se mostrado como uma opção promissora e sustentável, tendo em vista a melhoria da produção, redução de custos deprodução e baixo impacto ecológico nos agroecossistemas. Essas bactérias colonizam a rizosfera e tecidos internos das plantas promovendo benefícios àsculturasagrícolas eestão em interações constantes com microrganismos autóctones. Diante desse cenário,objetivou-se avaliaro efeito da inoculação com Azospirillumbrasilensesobre a diversidade bacteriana da rizosfera dediferentes híbridos de milho, o acúmulo de nutrientes e a produtividade de grãos. Utilizou-se diferentes genótipos de milho inoculados com uma mistura de três estirpes de Azospirillumbrasilense. Adiversidade bacteriana foi estimada em amostras de DNA total extraído do solo rizosférico, após o sequenciamento de segunda geração. O acúmulo de nutrientes e a produtividade foram mensurados nafase de florescimento e final do ciclo respectivamente. Os resultadosda análise metagenômicamostraram queacomposição e estruturavariamem função do genótipo da planta e do inoculante, mas existemalterações principalmente na abundância de alguns filos e gêneros presentes nas amostras de solo.Houve ganhos de produtividade de grãos e de acúmulo de nutrientes em função da inoculação dosgenótipos avaliados. Portanto,conclui-se queaformação da estrutura e composição da comunidade bacteriana do solo rizosférico das plantas foi dependente da inoculação com Azospirillumbrasilensee do genótipo da planta. As características agronômicas do milho (Produtividade e acúmulo de nutrientes) são influenciadas pelo uso de inoculantes.

A epilepsia é uma desordem neurológica que pode ter como causa a ocorrência de um insulto neurológico que induz um posterior quadro de hiperexcitabilidade do tecido nervoso, possibilitando a ocorrência de crises espontâneas. O exercício físico tem se mostrado capaz de gerar melhorias no quadro do indivíduo com epilepsia, exercendo um efeito neuroprotetor. Neste trabalho, foi avaliado o potencial da prática do exercício físico durante a vida adulta como terapia para tratamento de vítimas de injuria neurológica durante o desenvolvimento cerebral. Os resultados encontrados neste estudo demonstram que o exercício físico pode ser capaz de produzir efeitos protetores tanto sobre a integridade do tecido nervoso, quanto sobre alguns dos mecanismos de controle da homeostase iônica afetados pelo insulto neurológico promovido pelo status epilepticus por injeção de pilocarpina, restabelecendo os níveis de excitabilidade e as características eletrográficas de populações de células nervosas a níveis próximos dos observados no tecido intacto.

Modificações na paisagem natural podem afetar os ecossistemas lóticos devido à próxima
relação que os riachos têm com a paisagem do entorno, alterando a qualidade da água, sua
estrutura e funcionamento. Diferentes técnicas são utilizadas para avaliar os impactos do uso
do solo nos sistemas aquáticos e um grande número de indicadores biológicos tem sido utilizado
para determinar a eficácia de diferentes abordagens para o gerenciamento dos riachos. O
biofilme é um dos principais componentes biológicos do metabolismo em ecossistemas lóticos
e é formado por uma comunidade de células autotróficas e heterotróficas envolvidas por uma
matriz extracelular crescendo sobre um substrato sólido. Esses organismos são sensíveis às
mudanças nas condições ambientais, podendo ser amostrados rapidamente e, possuem uma
ampla gama de atributos mensuráveis. O objetivo desse estudo foi avaliar a qualidade da água,
a estrutura da comunidade do biofilme, bem como o funcionamento ecossistêmico de riachos
sob diferentes tipos de impactos: naturais, pastagem, agricultura e urbanização, localizados
numa área de transição entre a Mata Atlântica e o Cerrado, em Minas Gerais. O trabalho
consistiu em uma amostragem anual em seis riachos localizados na bacia do Rio das Mortes,
entre junho 2014 e julho de 2015 e os resultados são apresentados em três capítulos. No capítulo
1, avaliou-se a qualidade da água, a biomassa autotrófica (mensuradas in situ, com a sonda
BenthoTorch, e após extração da clorofila-a em etanol) e a estequiometria do biofilme. Os
resultados indicaram que a qualidade da água é alterada pelos diferentes usos do solo, no
entanto, o impacto no biofilme pode não ser tão facilmente identificado com a avaliação de variáveis simples, como as concentrações totais de nutrientes ou biomassa. No capítulo 2, a
estrutura da comunidade do biofilme (algas, bactérias, ciliados e fungos) foi avaliada a partir
de técnicas microscópicas e moleculares (análise de polimorfismo de comprimento de
fragmentos terminais de restrição, T-RFLP). Uma análise de redundância baseada nas
distâncias (dbRDA) indicou que a comunidade algal, identificada via microscopia de luz, foi
influenciada pelo uso do solo, que explica 46,3% da variabilidade da comunidade, e separaram
todos os riachos, indicando que as especificidades de cada hábitat, tais como hidrodinâmica,
concentrações de nutrientes, condições de luz e temperatura, substrato e as interações biológicas podem influenciar a colonização do biofilme. Análises de dbRDA, para as comunidades
analisadas via T-RFLP, explicaram menos de 20% na variabilidade dos dados e foram
significativas para a comunidade de algas, bactérias e fungos, mas não para ciliados. Uma
comparação da comunidade algal avaliada via microscopia e molecular, não mostrou uma
relação significativa entre as abordagens e, embora a T-RFLP seja comumente relatada como
um método rápido para a análise do biofilme, nesse estudo, a microscopia se revelou mais
robusta em avaliar a estrutura da comunidade algal nos diferentes riachos. No capítulo 3, o
metabolismo ecossistêmico dos riachos foi avaliado através das taxas de produção primária
bruta (PPB) e respiração da comunidade (RC) que são, em grande parte, realizadas pelo
biofilme em riachos sem grandes biomassas de macrófitas ou algas filamentosas. A maior taxa
m-2d-1).
média de PPB foi encontrada em um riacho urbano (5, 25 g OD
As taxas de RC também
foram mais altas nos dois riachos urbanos e não houve diferenças entre riachos naturais e
agropastoris para ambas as taxas mensuradas. A taxa de RC encontrada em um dos riachos
m-2d-1),
urbanos foi a mais alta dentre as já relatadas na literatura (70 g OD
sugerindo que
entradas de carbono (C) associadas com o esgoto doméstico sejam mais lábeis do que a matéria
orgânica transportada naturalmente e, assim, poderia ser uma importante fonte C, possibilitando
altas taxas de RC. Por sua vez, a razão PPB:RC foi menor que 0,5, o que caracteriza uma cadeia
trófica heterotrófica em todos os riachos estudados. As baixas taxas de PPB em riachos m-2d-1)
agropastoris
(.
0,3 g OD
podem estar relacionadas às características do substrato, com
sedimento fino e instável considerado pobre para a colonização algal, além do pisoteio do gado
nas margens do riacho que possa ter contribuído para uma maior turbidez da água. Por sua vez,
a redução da matéria orgânica alóctone recebida por esses riachos, devido à remoção da
vegetação ciliar, parece ter influenciado as taxas de RC. Esses resultados indicam que, embora
as taxas metabólicas nos riachos naturais e agropastoris não tenham diferido, podem acontecer
mudanças no funcionamento desses sistemas devido às diferenças nas comunidades de cada
riacho. Finalmente, os resultados desse estudo indicam que a estrutura da comunidade do
biofilme de rios é considerada importante bioindicadora da qualidade da água e do
funcionamento ecossistêmico em riachos na transição entre Mata Atlântica e Cerrado. Com
esses dados, estratégias de manejo podem ser aplicadas, a fim de melhorar a qualidade da água
e os serviços ecossistêmicos dos riachos.

A qualidade nutricional do alimento disponível pode variar de acordo com as condições
ambientais, o que influencia na eficiência da transferência de matéria e energia em sistemas
lacustres naturais e impactados. Neste estudo, buscou-se responder questões relativas à
variabilidade espacial, temporal e associada à trofia, na qualidade nutricional do seston de
lagoas e reservatórios. O objetivo geral foi avaliar qual dos tipos de indicadores de qualidade
de biomassa sestônica – minerais (nitrogênio e fósforo totais) ou bioquímicos (lípides e
carboidratos totais) melhor responderiam às modificações ambientais, analisados sob a ótica
das mudanças na qualidade da água e nas comunidades fitoplanctônicas. A hipótese geral era
de que as maiores respostas seriam detectadas para a composição bioquímica. Foram
analisadas as variações naturais na composição mineral e bioquímica sestônica de cada
sistema (i) espaciais (horizontal - três diferentes distâncias da margem - e vertical - duas
profundidades) e (ii) temporais (entre quatro diferentes períodos de coletas), assim como as
variações entre sistemas de diferentes estados tróficos. Cinco lagoas e três reservatórios localizados no Campo das Vertentes, MG, foram amostrados em quatro campanhas de coleta
entre 2014 e 2016. Foi feita uma caracterização dos sistemas em seus aspectos físicos e
químicos (nutrientes totais e dissolvidos na coluna d’água, temperatura, condutância elétrica,
saturação e concentração de oxigênio dissolvido, pH, profundidade da zona fótica) e
biológicos (atributos da comunidade fitoplanctônica – composição e biomassa total e
concentração de clorofila-a no seston), a fim de determinar as variáveis ambientais e da
comunidade fitoplanctônica que pudessem estar relacionadas às diferenças na composição
mineral e bioquímica do seston nos sistemas analisados. A caracterização das lagoas e
reservatórios mostrou bastante distinção entre os oito sistemas. Na avaliação das diferenças
internas de cada sistema na composição mineral e bioquímica do seston praticamente não
houve variação espacial, tanto horizontal quanto vertical, para todas as variáveis indicadoras
de qualidade nutricional sestônica. Ocorreram variações raras e isoladas, o que provavelmente
está relacionado às pequenas dimensões dos sistemas. Já a variação temporal foi observada
tanto para a composição mineral quanto bioquímica em todos os sistemas, sendo que a composição mineral mostrou uma tendência a concentrações mais altas na estação seca e mais
e mais baixas no período de transição. Por outro lado, as variáveis bioquímicas mostraram
maiores concentrações no período de transição entre seca e chuva. Não foi possível dizer que
um tipo de composição sestônica tenha variado mais que o outro, por isso a primeira hipótese
desse trabalho não foi corroborada. Na comparação entre os sistemas com diferentes estados
tróficos foram encontradas diferenças significativas tanto nas variáveis bioquímicas quanto
minerais do seston. As concentrações de PT e NT no seston foram maiores no sistema mais
oligotrófico, principalmente na coleta 1, de transição entre seca e chuva. Já a composição
bioquímica apresentou diferença significativa para a concentração de lípides, que se mostrou
menor no sistema mais eutrófico, mais evidenciado nas coletas 3 e 4. Assim, houve diferenças
significativas tanto na composição mineral quanto bioquímica, porém elas foram maiores
entre os dois extremos de estado de trofia na escala analisada. Não foi possível corroborar
claramente a segunda hipótese. Por fim, quando comparadas as respostas da composição
mineral e bioquímica do seston a variáveis ambientais e da biomassa fitoplanctônica, foram
mais fortes as relações entre a composição mineral e as variáveis indicadoras de trofia
(nutrientes dissolvidos) e de biomassa fitoplanctônica (inclusive concentração de clorofila-a).
As respostas da composição bioquímica foram menos significativas, mas tiveram relação negativa entre a concentração de lípides e as variáveis de trofia (por ex., NTD) e de biomassa
(clorofila-a), assim como positiva entre os lípides no seston e a concentração de OD. Esses
resultados refutam a terceira hipótese, mas chamam a atenção para um ponto importante,
podendo indicar que o aumento do estado de trofia, que normalmente é acompanhado pelo
enriquecimento de biomassa, pode levar ao empobrecimento da qualidade bioquímica do
seston. Isso reforça a questão da perda da qualidade nutricional em cadeias tróficas aquáticas
decorrentes do processo de eutrofização, que é um sério problema associado à degradação das
águas superficiais na atualidade.

Mecanismos não sinápticos desempenham um importante papel nas crises epilépticas. Neste
trabalho, examinamos como as atividades epileptiformes não sinápticas nas regiões de CA1 e
giro dentado do hipocampo de rato foram afetadas pela administração de cainato, em dois
protocolos distintos: injeção intraperitoneal (sistêmica) e injeção intra-hipocampal (local). O
modelo sistêmico resultou em alterações observadas 24h e 7 dias após status epilepticus, que
incluíram progressiva perda neuronal seguida de proliferação de células gliais em CA1, CA3 e
hilu, neurogênese no giro dentado e maior densidade de marcação para o cotransportador
NKCC1 em todas as regiões. A atividade ictal não sináptica, induzida com o protocolo zero-
Ca++ -K+, e alto foi mais pronunciada no giro dentado e abolida em CA1 em fatias dos grupos
cainato.
Bloqueio  de NKCC1 com bumetanida resultou em redução das atividades
epileptiformes, confirmando a influência deste cotransportador nas alterações registradas. A
fim de melhor compreender os efeitos diretos do cainato sobre o hipocampo e ainda realizar
uma comparação entre hemisférios, em um segundo momento do trabalho, o modelo de injeção
intra-hipocampal foi utilizado. Para tanto, os animais foram canulados e o cainato foi
lentamente injetado no hipocampo posterior direito de animais sob vigília, sem efeito de
anestesia.
Sete dias após status epilepticus, as atividades epileptiformes foram mais
pronunciadas no giro dentado de fatias dos dois hemisférios hipocampais em relação ao
controle, embora a expressão de NKCC1 não tenha apresentado diferença significativa (p<0,05). Em ambos os hemisférios foi identificada maior densidade de marcação de
interneurônios de paralbumina e conexina-36 também no giro dentado. Uma comparação entre
hemisférios apontou diferenças significativas para os parâmetros DC (maior emplitude) e PS (menor amplitude) do giro dentado ipsilateral,
sugerindo maior movimentação iônica nesta região durante as atividades epileptiformes. O
hipocampo ipsilateral apresentou morte de células em CA1, CA3 e hilu, diferentemente do
hipocampo contralateral. Em ambos, as células granulares permaneceram preservadas. Este
trabalho permite concluir que diferentes estruturas e mecanismos podem interferir no padrão
eletrográfico das atividades epileptiformes não sinápticas. Os estudos com os dois modelos
sugerem que as alterações não-sinápticas no giro dentado contribuem de forma importante para
seu protagonismo na geração de crises epilépticas na fase inicial da epileptogênese em ratos.

O Brasil é o segundo maior produtor mundial de soja. Diante disso, os coprodutos do
processamento térmico da extração do óleo do grão de soja integral apresentam potencial
para serem utilizados na nutrição de vacas leiteiras. A torta de soja (TS) é um subproduto
obtido por meio do processo de extrusão em prensa extrusora Bindgalvão® para
obtenção do óleo e da TS. Este subproduto além de ser fonte protéica para a produção
animal, pode também ser utilizado como alternativa de suplementação lipídica devido ao
teor de extrato etéreo mais elevado que o do farelo de soja comercial (FSC), possuindo
potencial teórico para mitigar CH4 entérico em sistemas de produção. Os objetivos deste
estudo foram: i. avaliar o efeito da substituição do FSC pela TS no desempenho de vacas
leiteiras e seu potencial de mitigação de CH4 entérico; ii. avaliar o método da máscara
facial para mensuração das emissões de CH4 quando comparado ao método padrão
câmara respirométrica. Foram utilizadas 32 vacas (Holandês × Gir) com 112 ± 25,1 dias
de lactação, produção de leite média de 20,8 ± 2,92 Kg/d e 551 ± 45,4 Kg de peso vivo no início do período experimental. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos por produção de leite, ordem de lactação e peso vivo, de acordo com a dieta fornecida (0, 6%, 14% e 23% de inclusão de TS na dieta com base na matéria seca). As
dietas foram formuladas utilizando LRNS para atender as exigências de proteína e energia
de uma vaca de 550 Kg produzindo em média 25 Kg/d de leite, e foram idênticas quanto
a sua composição química com excessão aos teores de extrato etéreo que aumentaram a
medida que as proporções de TS aumentava na dieta. Para avaliação do desempenho dos
animais, a dinâmica de consumo, ingestão de água, peso vivo e a produção de leite foram

mensuradas automaticamente ao longo de todo o experimento. Foi também realizado
ensaio de metabolismo para determinação da digestibilidade da matéria seca e dos
nutrientes das dietas experimentais. Amostras de sangue foram coletadas para avaliação
das concentrações de ácidos graxos não esterificados (AGNE), beta-hidroxibutirato
(BHBA), colesterol, triglicérides e nitrogênio uréico no plasma (NUP). Durante as 4
ultimas semanas do período experimental as emissões de CH4 entérico foram mensuradas
por meio da câmara respirométrica, e sequencialmente, pela técnica da máscara facial.
Amostras de líquido ruminal foram coletadas por meio de sonda esofágica, para
identificação das populações de Archaeas metanogênicas. O delineamento experimental
utilizado foi inteiramente casualisado (DIC) e os dados foram analisados utilizando
utilizando o PROC MIXED do SAS. Os ajustes entre as emissões de CH4 utilizando a
máscara facial × câmara respirométrica (regressão linear, viés médio e coeficiente de
correlação e concordância; CCC) foram analisados utilizando o PROC REG do SAS. Os
dados de DNA microbiano para identificação das populações de Archaeas foram
analisados utilizando o software R e QUIME. A medida que os níveis da TS aumentavam
foi observado uma redução na produção de CH4 (g/Kg CMS e g/Kg leite), sendo o nível de inclusão de 14% o tratamento que resultou na maior redução, diminuindo as emissões de CH4 em 11,5 e 20,2% respectivamente. A utilização da TS na nutrição de vacas leiteiras como suplemento lipídico não afetou o desempenho, a produção de leite, a
população microbiana ruminal e foi capaz de reduzir as emissões de CH4 entérico. Não
houve diferença entre a técnica da máscara facial e a câmara respirométrica para a
produção de CH4 (g/dia, g/Kg PM0,75 e g/Kg leite), entretanto, as concentrações de CH4
(g/Kg CMS) foram menores para a máscara facial em comparação com a câmara
respirométrica. As análises de regressão linear, viés médio e CCC demonstraram que as mensurações realizadas por meio da máscara facial foram capazes de representar as emissões de CH4 obtidas por avaliação em câmara respirométrica. A máscara facial possui potencial para ser utilizada em futuros experimentos in vivo o que permite a coleta de dados de maior número de animais ou tratamentos. A TS é uma alternativa ao FSC
podendo ser utilizada em dietas de vacas leiteiras como estratégia para a mitigação de
CH4 entérico.

Herbicidas a base de glifosato (C3H8NO5P) possuem amplo espectro de ação sendo associados à impactos ambientais. O desenvolvimento de metodologias eficientes e de baixo custo para a detecção desta substância em amostras de água é importante para inferir seu potencial deletério na estrutura e funcionamento de ecossistemas aquáticos. Este trabalho objetivou (1) otimizar o tempo de reação da análise de glifosato por espectrofotometria automatizada de injeção em fluxo, baseada na reação cromogênica entre o glifosato e o reagente p-dimetilaminocinamaldeído (p-DAC), e (2) testar o método optimizado em amostras de água de riachos submetidos a diferentes usos do solo. O tempo para a cinética desta reação foi testado medindo-se a absorbância de uma solução padrão de 5 mg/l de glifosato após reação com (p-DAC) por 60, 120, 240, 480, 960 e 1920 segundos. A cinética da reação com o p-DAC saturou em aproximadamente 720 s, sugerindo que a Análise de Injeção em Fluxo (FIA) do glifosato possa ser otimizada aumentando-se o tempo de reação para 720 s. Esse método também foi capaz de detectar concentrações ambientais de glifosato em amostras locais, provando ser um método eficiente e de baixo custo para acessar os impactos ambientais de glifosato em sistemas aquáticos. A análise de amostras de água coletadas semanalmente em córregos localizados em áreas naturais, agrícolas e urbanas da rede de drenagem da Bacia do Rio das Mortes demonstrou que as amostras das regiões naturais não apresentaram resultados que indiquem contaminação por herbicidas à base de glifosato, enquanto os riachos localizados em áreas sob influência da atividade agrícola apresentaram resultados que demonstram uma clara contaminação por glifosato (concentrações de até 3,64 mg/l ±0,69). As análises das amostras dos córregos urbanos mostraram níveis elevados de contaminação por glifosato (concentrações de até 5,61 mg/l ±0,174). Assim, concluímos serem necessárias medidas mitigadoras que reduzam a concentração de glifosato nos riachos da bacia do Rio das Mortes, a fim de se evitar danos à saúde e à estrutura e funcionamento ecossistêmicos.

O parasito extracelular Tritrichomonas foetus(T. foetus) é um protozoário flagelado responsável pela tricomoníase bovina, uma doença sexualmente transmissível frequente em gados que implica em importante perda na produção devido às falhas reprodutivas que acarreta. A sobrevivência de T.foetusdurante a interação parasito-hospedeiro é dependente de ferro, já que a disponibilidade desse metal regula diversas vias metabólicas dos parasitos e a expressão de fatores de virulência tais como moléculas de adesão e enzimas proteolíticas. Neste trabalho, foi investigadoo efeito da depleção do ferro sobre a morfologia e ciclo de vida de T. foetus, assim como, a regulação da plasticidade dos parasitos durante interação com matrizes 3D de colágeno I por este metal. Análises por microscopia eletrônica de varredura e por transmissão revelaram que a depleção de ferro do meio de cultura (meio indutor TYM-DIP) induz a transformação morfológica de trofozoitos típicos em pseudocistos esféricos, letárgicos e sem motilidade. Embora o ferro seja requerido para a sobrevivência de T. foetus,a depleção deste metal não causa um colapso celular e morte em toda a população do parasito, mas induz, nos pseudocistos, alterações celulares, provavelmente, capacitando-os a sobreviver à condição do estresse nutricional. Nestas formas, a depleção de ferro provoca a ativação de eventos autofágicos que se prolongadospode levar essa população à morte por um mecanismo similar à morte celular por xiiautofagia e não por apoptose clássica. De fato foi observado que o inóculo de pseudocistos em meio rico em ferro (meio TYM padrão), ou a adição de FeSO4ao meio indutor TYM-DIP, reverte o processo de transformação morfológica e recupera a população de trofozoitos típicos, sugerindo com isto, que os pseudocistos são formas de resistência, viáveis e reversíveis. Foi evidenciado que o ferro modula a plasticidade de T. foetusdurante a interação com matrizes 3D de colágeno tipo I, as duas formas celulares -trofozoítos típicos e pseudocistos -reconhecem e têm capacidade de aderir às matrizes. Ademais, a fim de caracterizar a cepa K de T. foetusfoi demonstrado que trofozoítos típicos são capazes de aderir e fagocitar células do epitélio vaginal humano, sugerindo que,a interação deste parasito não é espécie-e célula-específica.Finalmente, ainda com o objetivo de caracterização da cepa K utilizada neste estudo, espectrometria de massa(LC-MS/MS) acoplada à enzimografia 1D revelou o perfil de cisteíno proteases(CP)no extrato total eno secretoma deT. foetus. Dentre as proteínas presentes na secreção, uma importante CP envolvida nos processos de indução de morte celular da célula hospedeira e de evasão da morte pelo complemento, foi também identificada