Lectina recombinante de Bauhinia holophylla: expressão, caracterização e avaliação de atividade biológica
DNA, clonagem, expressão heteróloga, bioinformática, Bauhinia, Cerrado
Bauhinia holophylla (Fabaceae:Cercidoideae) é uma espécie do Cerrado, amplamente distribuída no Brasil, que se regenera na natureza por meio de sementes e cuja produção ocorre durante poucos meses do ano. O estabelecimento das mudas é lento e prejudicado por condições ambientais desfavoráveis e pelo ataque de patógenos e herbívoros. As folhas, flores e caules contêm diferentes grupos de substâncias de interesse medicinal, sendo que as lectinas têm merecido especial atenção, devido seu amplo potencial biológico contra microrganismos, insetos, vírus e células tumorais. O cultivo in vitro, especialmente a cultura de calos, representa uma ferramenta de grande importância ecológica, pois permite o desenvolvimento de pesquisas que estabeleçam formas alternativas para a conservação e melhoramento do material genético, além de constituir uma maneira alternativa para obtenção de DNA genômico, para ensaios de biologia molecular e estudos genéticos da espécie. A presença de diferentes isoformas de lectinas em extratos vegetais muitas vezes dificulta um estudo mais detalhado dessas misturas heterogêneas. Dessa forma, a expressão de lectinas em sistemas heterólogos possibilita o estudo individualizado de cada isoforma e permite a obtenção dessas proteínas independe da exploração da planta. Os objetivos desse trabalho são caracterizar, expressar e avaliar as atividades antimicrobiana e antitumoral de lectina recombinante de Bauhinia holophylla, com a finalidade de possibilitar estudos visando futuras aplicações biotecnológicas para esta proteína. Até o momento foram realizados ensaios de amplificação, clonagem e sequenciamento gênico, além da caracterização de uma isoforma de lectina de Bauhinia holophylla (BhL) usando ferramentas de bioinformática, por meio das quais as características físico-químicas e evolutivas, estrutura e propriedades funcionais foram previstas. O gene Bhl foi sequenciado a partir de material genômico obtido de culturas de calos e a sequência gênica foi depositada no repositório de sequências do GenBank. Este estudo possibilitará uma investigação mais detalhada sobre o padrão de expressão heteróloga de lectinas em B. holophylla, além da perspectiva da obtenção futura de lectinas por meio de suspensões celulares. Os calos farão parte de um banco de germoplasma que permitirá a realização de estudos subsequentes relacionados a obtenção de lectinas de maneira alternativa. Isso contribuirá para a preservação e manipulação sustentável de B. holophylla e permitirá futuros estudos estruturais, funcionais e de atividades biológicas dessas lectinas. Com a expressão heteróloga da lectina espera-se criar um banco de dados de lectinas recombinantes para ser utilizado em testes de atividades antitumoral, inseticida e de toxicidade.