Banca de DEFESA: KAMILA ALVES SILVA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : KAMILA ALVES SILVA
DATA : 18/02/2025
HORA: 13:30
LOCAL: viodeconferencia
TÍTULO:

EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES PARA O
IMUNODIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR HUMANA

PALAVRAS-CHAVES:

cutaneous leishmaniasis; recombinant protein; protein multiepitope recombinant; serological diagnosis.

PÁGINAS: 100
RESUMO:

A leishmaniose tegumentar é considerada uma doença negligenciável consolidada,
sendo endêmica em 92 países, com uma estimativa de ocorrência de 600.000 a 1
milhão de novos casos por ano. O Brasil está entre os nove países endêmicos com
o maior número de casos da doença, com uma média de 21.000 casos por ano. A
busca por uma tecnologia rápida e eficaz para diagnosticar a leishmaniose
tegumentar permanece crucial, considerando que esta é uma doença tropical
negligenciada amplamente disseminada. Para conseguir um diagnóstico mais
acurado desta infecção, proteínas recombinantes e proteínas multiepítopos
recombinantes têm sido extensivamente desenvolvidas por pesquisadores e
utilizadas no diagnóstico da leishmaniose tegumentar, com resultados promissores.
Um dos benefícios da aplicação destes antígenos é um aumento mensurável na
sensibilidade e especificidade, o que melhora a precisão do teste. Neste sentido, o
presente trabalho tem como objetivo expressar, purificar e fazer uma prova de
conceito inicial de dos antígenos, sendo uma proteína recombinante e uma nova
proteína multiepítopo recombinante inovadora. Estudos prévios do nosso grupo de
pesquisa selecionaram epítopos por análise in silico de uma proteína já conhecida
no diagnóstico sorológico da leishmaniose tegumentar. Esses epítopos foram unidos
para criar uma nova proteína multiepítopo recombinante, denominada nesse
trabalho como rMELT1. Ademais, a proteína tryparedoxin peroxidase usada na
análise in silico também foi utilizada no presente trabalho, sendo denominada de
rTpe. Primeiramente, foi feita uma mini-prep plasmidial para realizar a propagação
do plasmídeo, utilizando cepas DH5α de Escherichia coli. Posteriormente, cepas
pLysE e pLysS de E. coli foram utilizadas para a expressão heteróloga de rMELT1 e
rTpe. Após a expressão, verificou-se que apenas rMELT1 foi expressa com sucesso,
sendo confirmada por Western blotting e, posteriormente, purificada por
cromatografia de afinidade com níquel. Para tentar alcançar a expressão de rTpe, a
cepa Escherichia coli Arctic Express foi utilizada. Entretanto a expressão heteróloga
de rTpe não foi expressa com sucesso. Após a quantificação de rMELT1, foi
realizado um ensaio de ELISA preliminar utilizando soros de indivíduos negativos e
soros de indivíduos portadores da leishmaniose cutânea e mucocutânea. Observou-
se que a rMELT1 foi capaz de discriminar entre soros positivos da leishmaniose
mucocutânea e negativos. Os dados obtidos demonstram a importância de se
realizar pesquisas com novas tecnologias focadas no desenvolvimento de kits de
diagnósticos rápidos e mais eficazes, pois o diagnóstico precoce facilita o
tratamento. Portanto, os resultados desta pesquisa revelam um potencial candidato
ao diagnóstico da leishmaniose tegumentar. Além disso, não existe um kit de
diagnóstico genuinamente brasileiro baseado na estratégia multiepítopo, o que
respalda a importância do desenvolvimento deste trabalho e demonstra a inovação
do método frente aos métodos atualmente disponíveis.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1367304 - ALEXSANDRO SOBREIRA GALDINO
Externa ao Programa - 1581667 - DANYELLE ROMANA ALVES RIOS
Externo à Instituição - EDUARDO ANTONIO FERRAZ COELHO - UFMG