AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE BIOLÓGICA DA CADEIA BETA DO HORMÔNIO FOLÍCULO-ESTIMULANTE BOVINO

RECOMBINANTE (rbFSH-β) PRODUZIDA EM Komagataella phaffii

Biotecnologia; Superovulação; Expressão heteróloga; FSH-β recombinante; Komagataella phaffii

As proteínas recombinantes são produtos biotecnológicos que diminuem o custo para obtenção de proteínas por meio da engenharia genética, o que consequentemente reduz a extração de proteínas de fonte animal. Proteínas envolvidas no ciclo reprodutivo animal produzidas de forma recombinante podem aumentar a eficiência dos protocolos de superovulação. O Brasil possui rebanho bovino comercial com mais de 200 milhões de animais, sendo um dos maiores produtores mundiais de alimento de origem animal. Para a produção animal, a reprodução é fundamental e pode ser realizada em laboratório por meio de técnicas de reprodução assistida, como a fertilização in vitro e transferência de embrião. Assim, técnicas de superovulação utilizando o hormônio folículo-estimulante (FSH) são realizadas para se obter melhores resultados nesses

protocolos. Este projeto tem como objetivo avaliar a atividade biológica da cadeia beta do hormônio folículo-estimulante bovino recombinante (rbFSH-β) produzida em Komagataella phaffii. Os clones foram crescidos no meio sólido yeast extract-peptone-dextrose (YPD) e transferidos para o meio de fermentação com sais basais e PTM1, onde foram induzidos com metanol (1% v/v) e coalimentados com sorbitol (25 g/L) de 12/12H por 48 horas. Ao final do processo, o sobrenadante foi purificado por meio de tubos de ultrafiltração de 5 kDa e as amostras foram concentradas 30x. As amostras foram submetidas a SDS-PAGE 15% para confirmação da banda da rbFSH-β, e será submetida ao ELISA para maior especificidade. A quantificação proteica foi feita pelo método de Bradford. Para avaliação da atividade biológica, será realizado teste in vitro com células da granulosa e in vivo em camundongas fêmeas. A análise estatística será realizada por meio do software