Banca de QUALIFICAÇÃO: Cássio Siqueira Souza Cassiano

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Cássio Siqueira Souza Cassiano
DATA : 30/09/2024
HORA: 13:30
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

Caracterização das proteínas CpUng e CpMug de Corynebacterium pseudotuberculosis: Atividade de DNA glicosilase e conservação gênica

PALAVRAS-CHAVES:

Reparo do DNA, Via BER, gene Cpung, gene Cpmug, Corynebacterium pseudotuberculosis. 

PÁGINAS: 242
RESUMO:

Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da Linfadenite
Caseosa (LC), uma doença que causa grandes perdas econômicas na ovinocaprinocultura
no Brasil. O sequenciamento do genoma deste microrganismo incentivou estudos
genéticos com o objetivo de encontrar alvos terapêuticos contra a LC. As vias de reparo
de DNA, como o Reparo por Excisão de Base (BER), são cruciais para a manutenção da
integridade genômica e a sobrevivência do organismo e por isso as enzimas dessa via
podem ser consideradas importantes alvos moleculares. Neste estudo, focou-se na
identificação e caracterização das DNA glicosilases Mismatch uracil DNA glicosilase
(CpMug) e Uracil DNA Glicosilase (CpUng), responsáveis pela remoção de uracilas do
DNA, evitando efeitos mutagênicos. Análises in silico mostraram que CpUng pertence à
família I e CpMug à família II da superfamília UDG, ambas com domínios conservados
típicos de DNA glicosilases. Estudos filogenéticos revelaram que a proteína Ung está
presente em todas as linhagens de Corynebacterium ssp, sendo considerado um gene
housekeeping, enquanto a proteína Mug está presente em 27 espécies, tanto patogênicas
quanto não-patogênicas. As proteínas CpUng e CpMug foram clonadas, e expressas de
forma heterologa em Escherichia coli BL21 (DE3) e purificadas. Testes in vitro
utilizando HPLC demonstraram a atividade enzimática das proteínas UDG, confirmando
a capacidade do método utilizado para analisar a atividade de proteínas DNA glicosilase.
Por outro lado, nos primeiros testes in vitro realizados na University of Surrey foi possível
observar a capacidade das proteínas CpUng e CpMug de excisar uracilas do DNA de fita
dupla (dsDNA). Os resultados in silico e in vitro sugerem que CpUng e CpMug estão
envolvidas no reparo de uracilas em C. pseudotuberculosis. Contudo, ainda é necessário
entender por que este organismo possui duas enzimas para remover uracila, se elas
desempenham funções diferentes ou têm atividades sobrepostas. Novos ensaios serão
realizados para aprofundar o conhecimento sobre as funções de CpUng e CpMug no
reparo de DNA. Além disso, células nocaute para ambos os genes serão desenvolvidas
para avaliar seu papel na virulência e patogenicidade C. pseudotuberculosis.

MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 1222762 - ALEX GUTTERRES TARANTO
Externa ao Programa - 1146981 - MARINA QUADRIO RAPOSO BRANCO RODRIGUES
Presidente - 1084423 - RAFAEL GONCALVES TEIXEIRA NETO