Banca de DEFESA: Cássio Siqueira Souza Cassiano

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : Cássio Siqueira Souza Cassiano
DATA : 04/06/2025
HORA: 13:30
LOCAL: Sala de videoconferência - Campus Centro-Oeste
TÍTULO:

Caracterização molecular das proteínas Ung e Mug envolvidas no reparo por excisão de base em Corynebacterium pseudotuberculosis: uma abordagem integrada entre ensaios in vitro e bioinformática comparativa

PALAVRAS-CHAVES:

Reparo do DNA; Reparo por Excisão de Base; Proteína CpUng, Proteína CpMug; Corynebacterium pseudotuberculosis.

PÁGINAS: 256
RESUMO:

A via de Reparo por Excisão de Base (BER) é uma via de reparo do DNA importante para a manutenção genômica, responsável por remover bases não canônicas. As enzimas Uracil-DNA Glicosilase (CpUng) e Mismatch Uracil-DNA Glicosilase (CpMug) atuam prevenindo os efeitos mutagênicos causados pela presença da base uracila no DNA. Corynebacterium pseudotuberculosis, agente etiológico da Linfadenite Caseosa (LCA), é um microrganismo intracelular facultativo e está constantemente exposto a diferentes agentes genotóxicos. A ineficiência da via BER pode levar o organismo à morte celular e, diante disso, a caracterização de genes relacionados a essa via pode revelar potenciais alvos terapêuticos. O sequenciamento do genoma de C. pseudotuberculosis, estudos genéticos foram impulsionados, e este trabalho concentrouse na caracterização das enzimas CpUng e CpMug. Análises in silico indicaram que CpUng pertence à família I e CpMug à família II da superfamília UDG, ambas contendo domínios conservados típicos de DNA glicosilases. A análise filogenética envolvendo 100 espécies do gênero Corynebacterium revelou que a proteína Ung está presente em todas as linhagens, caracterizando-a como gene housekeeping, enquanto a proteína Mug foi identificada em 27 espécies, tanto patogênicas quanto não patogênicas, sugerindo não haver uma correlação com a patogenicidade e a presença dessas enzimas. As análises in silico também confirmaram a presença de domínios e resíduos catalíticos previamente descritos em proteínas homólogas. A modelagem apresentou estruturas compatíveis com proteínas homólogas, enquanto o docking demonstrou a interação dos resíduos catalíticos com o DNA. Com base nesses resultados, os genes cpung e cpmug foram clonados e sequenciados, e as proteínas foram expressas e purificadas. Ensaios in vitro com HPLC confirmaram a fragmentação do DNA pela proteína UDG, sugerindo atividade DNA glicosilase utilizando o protocolo desenvolvido neste trabalho. Adicionalmente, os testes in vitro realizados na University of Surrey mostraram que as proteínas purificadas CpUng e CpMug são capazes de remover uracilas do DNA de fita dupla (dsDNA), independentemente do pareamento, sendo que a proteína CpUng demonstrou ser mais eficiente na remoção da base uracila pareada com a base adenina. Entretanto, as proteínas não reconhecem outras lesões como THF, 8-oxoguanina e hipoxantina. Em conjunto, os dados in silico e in vitro sugeriem o envolvimento das proteínas CpUng e CpMug na via BER, desempenhando papel essencial no reparo de uracilas em C. pseudotuberculosis.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1682014 - DEBORA DE OLIVEIRA LOPES PAYNE
Externo à Instituição - DIEGO LISBOA RIOS
Interno - 1680474 - FABIO VIEIRA DOS SANTOS
Externa ao Programa - 1146981 - MARINA QUADRIO RAPOSO BRANCO RODRIGUES
Externa à Instituição - SIMONE DA FONSECA PIRES - IFSUDESTEMG