A expressão de proteínas recombinantes por meio de sistemas heterólogos é uma alternativa para produção de enzimas recombinantes. Os modelos disponíveis apresentam maquinário adequado para aumentar os níveis de produção de determinada proteína, permitir uma produção mais rápida e com níveis de produções superiores aos sistemas nativos, e fornecer segurança biológica ao produto produzido. Este trabalho refere-se à construção de uma linhagem da levedura Pichia pastoris (Komagataella phaffii) para a superprodução da enzima amilase de Cryptococcus flavus, a partir de metanol como fonte de carbono. A enzima α-amilase de C. flavus apresenta características interessantes do ponto de vista biotecnológico, como estabilidade térmica e manter sua atividade funcional em uma ampla faixa de pH. O gene rpAMY1 foi sintetizado in vitro com códons otimizados para expressão em K. phaffii no vetor de pPICZα-B. A partir disso, fez-se a amplificação do material genético e a transformação da levedura com o plasmídeo recombinante. Em seguida, o potencial de hidrólise do amido dos clones recombinantes pré-selecionados foi avaliado qualitativa e quantitativamente. Os resultados preliminares mostraram que o gene da α-amilase foi expresso com sucesso em células de K. phaffii e dois clones recombinantes são fortes candidatos para aplicações biotecnológicas da enzima expressa, por apresentaram valores de atividade enzimática superiores aos já encontrados na literatura, quando expresso em seu hospedeiro nativo quanto na hospedeira Saccharomyces cerevisiae.