Produção de uma proteína recombinante contendo o epítopo Sm043300e de Schistosoma mansoni para diagnóstico da esquistossomose

proteína recombinante, S. mansoni, diagnóstico, esquistossomose.

O desenvolvimento de um teste diagnóstico para a esquistossomose exerce um papel importante nas estratégias de controle e eliminação da doença. Devido à mudança no perfil epidemiológico da doença, existe a necessidade do uso de um teste de diagnóstico mais sensível e específico do que os atualmente disponíveis. Em um

trabalho realizado por nosso grupo de pesquisa, um epítopo proveniente da proteína Smp_043300.1, descrita como receptor de dopamina, pertencente à família rodopsina dos GPCRs, foi identificado e predito, através da técnica de vacinologia reversa, com afinidade de ligação por moléculas de MHC II humanas e de camundongos. A predição de epítopos lineares de células B também foi realizada com o epítopo Sm043300e, que foi predito como epítopo de célula B. O epítopo foi sintetizado e a sua imunogenicidade foi confirmada por sua capacidade de induzir a proliferação de células TCD4+ em camundongos sensibilizados por um coquetel de peptídeos

sintéticos contendo epítopos selecionados por vacinologia reversa. Adicionalmente, este peptídeo foi reconhecido por anticorpos presentes no soro de indivíduos infectados com S. mansoni. Diante deste contexto, foi construído um gene sintético que contém a sequência do epítopo Sm043300e e uma porção da proteína Smp_043300.1 para ser utilizado como alvo no diagnóstico sorológico da esquistossomose. A sequência da proteína recombinante foi caracterizada a partir de ferramentas de bioinformática e sua expressão foi realizada em E. coli. Na análise in silico, a sequência proteica da recombinante apresentou 85 aminoácidos, um pI teórico de 6.69, peso molecular de 9,56 kDa e foi predita como uma proteína hidrofílica. A análise de predição de domínio funcional mostrou que os domínios encontrados na proteína Smp_043300.1 não estavam presentes na sequência utilizada para compor a recombinante. A proteína Smp_043300.1(1-43)r foi expressa em E. coli BL21-CodonPlus, à 37°C, e em E. coli Arctic Express, à 12°C. A proteína recombinante foi solubilizada, usando uma solução de lise contendo 8M de ureia, e purificada, por cromatografia de afinidade, com o uso de imidazol nas etapas de lavagem (40mM) e eluição (250mM). Os próximos passos consistem em padronizar e

avaliar sua utilização em um teste de diagnóstico quanto a sensibilidade e especificidade utilizando soro de indivíduos infectados ou não por S. mansoni.