Produção de uma proteína recombinante contendo o epítopo Sm043300e de Schistosoma mansoni para diagnóstico da esquistossomose

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O desenvolvimento de um teste diagnóstico para a esquistossomose exerce um papel importante nas estratégias de controle e eliminação da doença. Devido à mudança no perfil epidemiológico da doença, existe a necessidade do uso de um teste de diagnóstico mais sensível e específico do que os atualmente disponíveis. Em um trabalho realizado por nosso grupo de pesquisa, um epítopo de um receptor de dopamina (Sm043300e), pertencente à família rodopsina dos receptores acoplados à proteína G (GPCRs), foi identificado pela técnica de vacinologia reversa. Esse epítopo apresentou afinidade de ligação por moléculas de MHC II humana e murina e foi predito como epítopo linear de célula B. Além disso, ele foi capaz de induzir proliferação de células TCD4+ em camundongos sensibilizados por um coquetel de peptídeos sintéticos e foi também reconhecido por anticorpos presentes no soro de indivíduos infectados com Schistosoma mansoni. Diante deste contexto, o objetivo deste trabalho foi produzir uma proteína recombinante contendo o epítopo Sm043300e e uma porção deste receptor de dopamina para ser avaliado como alvo no diagnóstico sorológico da esquistossomose. A sequência da proteína recombinante SmDOPAR.1-43r foi caracterizada a partir de ferramentas de bioinformática e sua expressão foi realizada em Escherichia coli. Na análise in silico, a sequência proteica da proteína SmDOPAR.1-43r apresentou 85 aminoácidos, um ponto isoelétrico (pI) teórico de 6,69, peso molecular de 9,56 kDa e foi predita como uma proteína hidrofílica. A análise de predição de domínio funcional mostrou que os domínios

encontrados neste receptor de dopamina não estavam presentes na sequência utilizada para compor a proteína recombinante. A proteína SmDOPAR.1-43r foi expressa em E. coli BL21-CodonPlus e E. coli Arctic Express, solubilizada e purificada, por cromatografia de afinidade. A proteína SmDOPAR.1-43r foi utilizada em um teste

ELISA para avaliar o seu reconhecimento específico por anticorpos IgG no soro de indivíduos infectados por S. mansoni. O teste de ELISA desenvolvido com a proteína recombinante apresentou sensibilidade de 58,62% e especificidade de 54,55% com um ponto de corte de 0,3711. Diante desses resultados, a proteína SmDOPAR.1-43r não se mostrou um bom alvo para o diagnóstico sorológico da esquistossomose.