Banca de DEFESA: PRISCILA AMARAL DINIZ

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : PRISCILA AMARAL DINIZ
DATA : 30/05/2022
HORA: 08:30
LOCAL: meet.google.com/ovm-uqeh-xvg
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE UM SISTEMA E EXPRESSÃO HOMÓLOGA EM Penicillium camemberti

PALAVRAS-CHAVES:

biotecnologia, Penicillium camemberti, modificações genéticas, sistema de expressão, fungos filamentosos

PÁGINAS: 61
RESUMO:

A manipulação genética de organismos tem se mostrado um dos avanços mais promissores da biotecnologia, sendo possível destacar o desenvolvimento da obtenção de produtos de interesse econômico e industrial. Com a finalidade de produção de proteínas de interesse, podem ser desenvolvidos sistemas de expressão que são sistemas de produção de proteínas gerados através da modificação genética de um organismo. Embora os fungos filamentosos sejam microrganismos que detêm um robusto sistema de secreção de proteínas, não há um sistema de expressão disponíveis comercialmente neste organismo, além de haver uma escassez de trabalhos científicos utilizando tais sistemas. Neste trabalho foi iniciado o desenvolvido de um sistema de expressão homológa em Penicillium camemberti. Esse é um fungo filamentoso que possui bioprocessos com status GRAS para produção de lipase, realiza modificações pós-traducionais como glicosilação, fosforilação e pontes dissulfeto, faz secreção de grandes quantidades de enzimas no meio extracelular, além de ser cultivado em meios de baixo custo e possuir potencial para melhoramento genético. Para o estudo do sistema de expressão, selecionou-se uma galactosidase, a alfa-amilase (α-amy), oriunda do próprio Penicillium camemberti, assim como os componentes de uma ORF, fase de leitura aberta, como as sequencias promotora e terminadora. Para tal, foi utilizada a técnica de reação em cadeia da polimerase de fusão (PCR de fusão), que permite obter várias ORFs com diferentes promotores e terminadores, possibilitando otimizar as construções para produção de proteínas de interesse industrial.  Com a finalidade de se testar o nível de expressão da ORF com diferentes construções, escolheu-se promotores constitutivos e induzíveis já utilizados em vetores de expressão em outros microrganismos. Com as amplificações das sequências dos promotores, do gene alvo e terminador, otimizou-se a PCR de fusão. Paralelamente, realizou-se análises in silico da enzima alfa-amilase para obter dados como características físico-químicas, estruturais, localização celular e similaridade. Alguns dados obtidos foram de número de aminoácidos, peso molecular, ponto isoelétrico teórico, número de resíduos carregados negativamente, número de resíduos carregados positivamente e coeficiente de hidropaticidade. Os estudos preliminares indicaram que a alfa-amilase de P. camemberti é uma enzima extracelular e que é facilmente secretada do meio intracelular, o que já indica que está é uma enzima cujas características tendem a ser promissoras a produção em larga escala para diversos fins como na aplicação da indústria têxtil e alimentícia.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1757978 - DANIEL BONOTO GONCALVES
Externa ao Programa - 2254152 - MAIRA NICOLAU DE ALMEIDA
Externo à Instituição - MOACYR COMAR JUNIOR - UFU