Melatonina é um hormônio fornecido pela mãe ao feto durante o desenvolvimento e atua como um antioxidante em processos celulares importantes do sistema nervoso. O uso de Ácido Valproico (VPA) durante a gravidez é usado como modelo para o estudo do Transtorno do Espectro do Autismo (TEA). Avaliamos se a ausência de melatonina materna durante o desenvolvimento intrauterino resulta em danos semelhantes ao autismo na prole, como observado em animais expostos ao VPA. Ratos Wistar foram divididos em cinco grupos: pinealectomizados com e sem suplementação de melatonina, procedimento cirúrgico sem remoção da glândula pineal (SHAM), injeção de VPA no 13º dia de gestação e injeção de salina como controle de VPA. Dois dias após o nascimento e após a quarta semana de vida, a prole foi sacrificada, o encéfalo de neonatos e cerebelo de ratos jovens foram coletados e analisados quanto ao teor de GSH, produção de H₂O₂, peroxidação lipídica e atividade da Na,K-ATPase e suas isoformas. Nossos resultados em neonatos apresentaram diferenças entre gêneros nos níveis de estresse oxidativo, com machos apresentando níveis mais elevados que fêmeas. Já no cerebelo, verificamos efeitos semelhantes na prole de ratos pinealectomizados e expostos ao VPA, com aumento de estresse oxidativo, peroxidação lipídica e diminuição de GSH, bem como déficits na atividade da Na,KATPase. A suplementação de melatonina exógena restaurou os níveis normais de parâmetros oxidativos e da atividade total e da isoforma α1-Na,K-ATPase no cerebelo. Em resumo, este estudo mostra que o estresse oxidativo pode desempenhar um papel importante na etiologia do TEA e destaca a importância da melatonina materna na prevenção de distúrbios do neurodesenvolvimento na prole. Além disso, aponta para possíveis diferenças de gênero que serão investigadas em estudos futuros. 

Paullinia cupana Kunth pertence à família Sapindaceae, conhecida popularmente como guaraná. O cultivo comercial do guaraná ocorre principalmente no Brasil, onde a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa) Amazônia Ocidental mantém um programa de melhoramento. O Brasil é o maior produtor de guaraná do mundo, segundo dados levantados pelo IBGE, 2021 a produção média de guaraná foi de aproximadamente 2.732 t/ano. Devido à alta concentração de cafeína, o guaraná é muito utilizado como matéria-prima para a fabricação de sucos, energéticos e refrigerantes. O processamento de sementes para esse fim resulta em um grande número de resíduos ricos em matéria lignocelulósica, e o potencial de aproveitamento desses resíduos ainda é subestimado.

A obesidade é uma doença crônica caracterizada pelo acúmulo excessivo de gordura corporal, que pode gerar  distúrbio metabólico em todos os sistemas, incluindo no sistema nervoso, produzindo um processo de inflamação e de disfunção mitocondrial, principalmente pela produção excessiva de Espécies Reativas de Oxigênio (EROs). Esses distúrbios geram morte neuronal e alterações comportamentais. A atorvastatina é um fármaco frequentemente utilizado para hipercolesterolemia, quase sempre associada à obesidade. O objetivo desse projeto foi avaliar parâmetros comportamentais e bioquímicos em hipocampo e córtex de ratos wistar machos alimentados com dieta do tipo cafeteria e tratados com atorvastatina. Ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos:  dieta comercial – salina (CoSal), dieta comercial – atorvastatina (CoArt), dieta cafeteria – salina (CafSal) e dieta cafeteria – atorvastatina (CafArt). Administrou-se por gavagem a atorvastatina em doses de 10 mg/kg/dia e a salina em dose de 0,9% e os grupos cafeteria receberam água acrescida em 20% de sacarose.  Os animais foram submetidos a pesagem diariamente e passaram por teste comportamental de ansiedade no 23º dia e no 24º dia por testes de memória. No 25º dia, os animais foram eutanasiados, o sangue foi coletado para a quantificação do colesterol por método colorimétrico e o corpo foi dissecado para retirada e pesagem das gorduras retroperitoniais e epididimais. Além disso, o córtex e os hipocampos foram dissecados e armazenados em freezer -80ºC, para realização posterior da quantificação de caspases e AIF por Western Blotting e para quantificação da lipoperoxidação pelo método de TBARS. O colesterol circulante foi afetado pela dieta e normalizado pela atorvastatina. Em relação ao peso, não houve variação do peso total, mas houve acúmulo de tecido adiposo nos animais cafeteria. A dieta cafeteria causou hipomobilidade e danos à memória espacial nos animais, e a atorvastatina inibiu esses efeitos. A dieta não causou problemas na memória de novo objeto nem na ansiedade, mas o uso de atorvastatina sem a dieta causou problemas nestes parâmetros. A expressão das proteínas apoptóticas (AIF e as caspases 8 e 9) foi aumentada pela dieta cafeteria e voltou ao controle com o uso de atorvastatina. A lipoperoxidação foi dosada pela metodologia de concentração de TBARS, nem a dieta nem a atorvastatina causam alterações nesse parâmetro.

Há algumas décadas estamos passando por uma mudança alimentar, tendo aumentado o consumo de alimentos hipercalóricos, juntamente com a diminuição da atividade física, contribuindo para o aumento da adiposidade na população mundial. Pacientes com alta adiposidade podem desenvolver doenças crônicas, como a diabetes mellitus tipo 2, hipercolesterolemia e doenças cardiovasculares (DCV). Em estudos, foi demonstrado que o desbalanço autonômico desempenha um importante papel na patogênese de diversas DCV, aumentando o risco de morte cardíaca. Desta forma, o intuito do presente estudo foi avaliar o efeito temporal de uma dieta com altos níveis de carboidratos e lipídeos na modulação autonômica cardiovascular em ratos através da análise do registro do eletrocardiograma (ECG) por métodos lineares e não lineares. Ratos Wistar foram alimentados por 24 dias com ração suplementada com itens de alta densidade calórica e água acrescida de sacarose (20%) ou com ração comercial e água ad libitum. Foram confeccionados e implantados eletrodos de ECG em ambos os grupos de animais. Antes do procedimento cirúrgico os ratos receberam uma mistura de cetamina e xilazina, pentabiótico veterinário e meloxicam (doses ajustadas com o peso corporal). Nos dias 6, 12, 18 e 24 de dieta, foi realizado o registro do ECG dos ratos e ao final do experimento foram realizadas as análises lineares no domínio do tempo [média e desvio padrão (SDNN) e a raiz quadrada da média das diferenças entre intervalos RR consecutivos elevado ao quadrado (RMSSD)] e no domínio da frequência [bandas espectrais de baixa (LF) e alta (HF) frequência e a razão LF/HF] e as análises por métodos não lineares, a dinâmica simbólica [padrões de variação da famílias (0V, 1V, 2UV e 2LV)] e a entropia multiescala (escalas de 1 a 25 e os agrupamentos de escalas 1 a 5 e de 6 a 25). Também foram avaliados a frequência cardíaca (FC), o intervalo cardíaco (IC) e o ganho de peso corporal. As normalidades foram testadas pelo teste de Shapiro-Wilk e as diferenças significativas analisadas pelo teste two-way anova, exceto pela análise da entropia multiescala (EMS) e do peso corporal que foram avaliados pelo teste t de Student. Os dados foram expressos como média ± EPM (P<0,05). O presente experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da UFSJ (protocolo 32/2017). Em ratos alimentados com a dieta controle, foi observado que o seu desenvolvimento induziu diminuição da atividade simpática nos dias 12 e 18 de dieta, avaliado pela família 0V da dinâmica simbólica, e no dia 24 na família 1V da dinâmica simbólica. Os animais alimentados com a dieta controle, durante seu desenvolvimento tiveram aumento no IC/diminuição da FC. Os animais alimentados com a dieta cafeteria apresentam aumento da FC/diminuição no IC. Foi encontrado nos animais alimentados com dieta cafeteria aumento na banda LF (%) e na razão LF/HF a partir do 12º dia de dieta, assim como na família 0V da dinâmica simbólica e redução da família 2UV neste período, em relação aos ratos controle. Estes dados sugerem aumento da atividade do sistema nervoso simpático (FC, IC, LF, LF/HF, 0V) dos animais tratados com dieta cafeteria e diminuição da atividade parassimpática (2UV). A entropia multiescala esteve aumentada apenas no 12º dia de dieta nas escalas de 3 a 25. É possível que os ratos alimentados com a dieta cafeteria possuam valor de entropia maior que os ratos alimentados com a dieta controle, com complexidade fisiológica menor. É possível concluir que durante o desenvolvimento do rato há diminuição da atividade simpática e aumento da atividade parassimpática para o coração. A dieta cafeteria ofertada aos ratos bloqueia esse efeito a partir do 12º dia de oferta da dieta, por consequência, a atividade simpática para o coração permanece aumentada nesses animais. Desta forma, a dieta cafeteria oferecida aos ratos por um curto período de tempo é suficiente para alterar o equilíbrio simpatovagal cardíaco.

Distúrbios na microbiota da pele estão relacionados a infecções e inflamação causadores de doenças como acne e entre outras. Alternativas para tratamento são cepas probióticas. Probióticos são microrganismos vivos que quando administrados em quantidades adequadas conferem benefícios à saúde do hospedeiro. A aplicação de lisados e inativados na indústria cosmética é uma tendência. Desde que os efeitos benéficos sejam mantidos eles apresentam vantagens, como transporte, vida útil, risco de translocação e infecção do consumidor. O objetivo deste estudo foi avaliar atividade antimicrobiana de sobrenadante livre de células, lisado e inativados, viabilidade, dano subletal, influência do meio de cultura em diferentes métodos, otimizar a produção de biomassa e microencapsulamento de isolados de bactérias do ácido láctico (BAL). Os sobrenadantes livre de células das quinze cepas de BAL não inibiram o crescimento de Corynebacterium xerosys ATCC 373 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442. Os únicos métodos capazes de inativar totalmente todas as cepas foram métodos térmicos. A viabilidade e danos subletais foi dependente da cepa, meio de cultivo e método de lise ou inativação. Os métodos de lise e inativação não mantiveram atividade antimicrobiana contra Cutibacterium acnes ATCC 6919. O MEV das cepas em soro de leite apresentou matéria orgânica envolvendo as células, não observado em MRS. A técnica de emulsificação / gelificação interna com alginato de sódio 5% proporcionou o encapsulamento de 61,94% sem liofilização e 37,83% com liofilização, sem sobrevivência gastrointestinal. Características físico-químicas foram analisadas por FTIR e microscópio óptico. A microcápsula perdeu atividade anti-acne. A realização da otimização cepa DE4 foi através do enriquecimento do soro de leite, utilizando o delineamento fatorial fracionado (DFF) e um delineamento composto central rotacional(DCCR), delineados pelo programa Minitab18. O bioprocesso obteve um alto nível de crescimento celular, alcançando valores maiores que 10¹⁵ UFC mL^-1 . Concluímos que BAL em suas formas lisadas ou inativadas e encapsuladas não mantiveram atividade anti-acne promissora. A otimização de produção da cepa probióticas torna cada vez mais possível o escalonamento do bioprocesso.

Rubéola é uma doença de importância epidemiológica causada por infecção com o vírus da rubéola (RV). O vírus é transmitido
por pessoas infectadas por meio de gotículas no ar. Muitos casos de anomalias congênitas ou mortes fetais foram relatados após
infecções por RV durante as primeiras 16 semanas de gravidez. Essas anomalias congênitas são particulares da síndrome da
rubéola congênita (SRC). Além disso, após o nascimento, a criança com SRC pode apresentar surdez, distúrbios oculares e
cardiopatias, além de outras sequelas tardias, incluindo autismo, diabetes mellitus e disfunção tireoidiana. Um dos maiores
desafios para o controle da Rubéola consiste no desenvolvimento de estratégias diagnósticas que permitam sua identificação com
elevada acurácia, e, ao mesmo tempo, possam ser aplicadas em países pobres ou em desenvolvimento. Isto significa que o método
diagnóstico necessariamente precisa apresentar elevado desempenho, reprodutibilidade, além de ter baixo custo de produção.
Estas premissas são fundamentais na incorporação da ferramenta diagnóstica para aplicação ao Sistema Único de Saúde (SUS), ou
ainda destinado a laboratórios particulares de análises clínicas, resultando em maior eficiência diagnóstica e redução de custos.
Nosso grupo vem trabalhando com a estratégia de produção de proteínas inovadoras, expressas em Escherichia coli (E. coli), que
resultaram em testes mais sensíveis e com menor custo de produção. Dentre as proteínas recombinante desenvolvidas por nosso
grupo está a quimera recombinante multiepítopo denominada rMERUB, desenvolvida por SOUZA e colaboradores (2021), que
em ensaios de ELISA preliminares, demonstrou resultados promissores para o diagnóstico de rubéola. O presente trabalho tem
como objetivo aperfeiçoar os resultados preliminares obtidos pelos autores, além de desenvolver novas tecnologias para a
produção de antígenos aplicados como insumos no diagnóstico por ELISA para Rubéola. Deste modo, padronizamos um kit de
diagnóstico para rubéola com a proteína recombinante multiepítopo rMERUB e otimizamos a expressão da proteína recombinante
em E. coli por meio da metodologia de superfície de resposta (MSR). Além disso, propomos a construção racional de dois novos
antígenos candidatos ao diagnóstico da rubéola. Para essa finalidade, realizamos análise in sílico de cada epítopo utilizado na
construção da proteína recombinante multiepítopo rMERUB, por meio da ferramenta vaxijen 2.0. O epítopo com maior valor de
antigenicidade foi selecionado para a construção de dois peptídeos sintéticos. Nossos resultados demonstraram que tanto a
proteína recombinante quanto os dois peptídeos sintéticos puderam discriminar significativamente soros positivos de soros
negativos. Por fim, a empresa BIOCLIN – QUIBASA demonstrou interesse em usar os antígenos deste trabalho para construção
de kits comerciais de diagnóstico para rubéola.

Os biossurfactantes são produzidos por diversos microrganismos. As propriedades biotecnológicas dos biossurfactantes (BS) são amplamente descritas na literatura. Desta forma, este trabalho teve como objetivos avaliar os potenciais de aplicação do lipopeptídeo, produzido a partir de um microrganismo, perante as propriedades bactericida, fungicida, decantador de efluentes, no espalhamento do óleo de motor, na biorremedição de óleo de motor na areia, na biorremediação de metais pesados no solo e em vegetais, além de sua toxicidade em ensaios in vivo com Artemia salina. Como resultado foi demonstrado que o lipepetídeo na concentração de 500 mg/mL apresentou um halo de inibição de 9 mm e valor de MIC de 0,08 mg/mL para a bactéria Gran-negativa Aeromonas hidroplyla, ao passo que para o fungo filamentoso Colletotrichum sp. não foi detectada nenhuma atividade inibitória. A avaliação qualitativa do lipopeptídeo no tratamento de efluentes demonstrou capacidade de decantação do efluente de esgoto em 24 h, ao passo que o com sulfato de alumínio foi de 30 min. Análise visual demonstrou que o lipopeptídeo apresentou melhor desempenho na área de dispersão do óleo quando comparado com Triton X-100 e SDS. A razão de espalhamento do óleo foi de 75, 48,7 e 59,7% para o BS, Triton X-100 e SDS, respectivamente. Após 24 h foi possível demonstrar que o óleo na presença do BS ficou concentrado no centro da placa. Análise visual da biorremediação de óleo de motor em areia demonstrou que o uso do lipopeptídeo na concentração de 0,1 mg/mL foi mais eficiente que na concentração de 0,5 mg/mL e em relação ao uso de 0,1 mg/mL de SDS. O lipopeptídeo na concentração de 0,1 e 0,5 mg/mL apresentou uma taxa de recuperação do óleo de motor da areia contaminada equivalente a 80 e 23%, respectivamente. O SDS na concentração de 0,1 mg/mL apresentou uma taxa de recuperação de 64%.Em baixas concentrações (até 0,1 mg/mL), os sobrenadantes foram atóxicos e não afetaram o comportamento de natação nem a taxa de sobrevivência de Artemia salina. Em altas concentrações (0,5 e 1 mg/mL), a taxa de mortalidade para o lipopeptídeo foi de 10%, enquanto para o composto SDS foi de 100%. Concluímos que o lipopeptídeo produzido a partir de um microrganismo mostrou-se com alto potencial de aplicação em diversos setores da indústria, como meio ambiente e saúde.

Enterocinas são um grupo de bacteriocinas secretadas por bactérias do gênero Enterococcus sp., que possuem atividade antimicrobiana, antiviral e antitumoral bem documentadas na literatura, porém, poucos estudos descrevem sobre a atividade anticandida destas enterocinas. Apesar de sua característica probiótica, e de ser muito utilizada na indústria contra deteriorantes alimentícios, a viabilidade da inserção de enterococos em alimentos tem sido descartada devido ao aumento da ocorrência de fatores de virulência nessas cepas. Uma excelente abordagem para a solução deste problema, é expressar enterocinas de forma heteróloga. Neste trabalho, a enterocina B, de Enterococcus faecium, foi caracterizada por ferramentas de bioinformática, expressa e purificada a partir de células de E. coli BL21(DE3) e ArcticExpress, a fim de verificar sua solubilidade durante a expressão. Finalmente, a Enterocina B foi testada para o seu efeito antifúngico em cepas de referência Candida albicans, resistente a antifúngicos, e Candida glabrata. Os resultados mostraram uma diferença na estrutura terciária, quando comparada com a literatura. A estrutura analisada neste trabalho apresentou duas regiões a-hélice, enquanto que na literatura, a Enterocina B apresentou quatro regiões a-hélice. No entanto, os resultados das predições físicoquímicas como quantidade de aminoácidos (53), pI teórico (9.25), peso molecular (5,4 kDa), anfipacidade, entre outros, corroboram com resultados publicados por outros autores. A expressão heteróloga em grande escala foi realizada em células ArcticExpress devido à expressão parcialmente solúvel do peptídeo, pois em células BL21 (DE3), a expressão ocorreu totalmente em forma de corpos de inclusão. Os resultados in vitro demonstraram que a Enterocina B não foi capaz de inibir o crescimento das cepas de Candida albicans e Candida glabrata em concentrações de 250 e 500 µg/mL, respectivamente, no ensaio de CIM. Uma provável hipótese seria de que a proteína de fusão GB1, expressa juntamente com a Enterocina B, para aumentar a estabilidade e solubilidade do peptídeo, pode estar impedindo a interação inicial que ocorre entre a porção N-terminal da Enterocina B e a membrana da célulaalvo. Dessa forma, testes adicionais envolvendo a Enterocina B, clivada da proteína de fusão, se tornam necessários para uma correta conclusão sobre a atividade deste peptídeo frente a cepas de leveduras.

Diazepam (DZP) é um dos benzodiazepínicos (BZDs) mais conhecidos, sendo amplamente utilizado como ansiolítico, anticonvulsivante e relaxante muscular. Levando-se em consideração o consumo crescente e indiscriminado de fármacos ansiolíticos em todo o mundo, juntamente com a escassez de trabalhos que avaliem os efeitos de BZDs nas células sanguíneas, além do fato de que, após a administração, o DZP permanece temporariamente na corrente sanguínea, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do DZP, sobre atividade das enzimas Na,K-ATPase e PMCA, integridade da membrana plasmática e parâmetros relacionados ao estresse oxidativo em eritrócitos humanos. Para isso, sangue humano foi incubado com DZP 15 μg/mL (solução injetável ou puro) por 30 e 60 minutos, a temperatura ambiente. Posteriormente, foram realizadas as seguintes etapas: preparação de membrana eritrocitária (ghost), extração lipídica, determinação da fragilidade osmótica, dosagem de fosfolipídios e colesterol totais e avaliação da atividade de enzimas antioxidantes e de parâmetros oxidativos. O tratamento com DZP injetável provocou uma diminuição na atividade da Na,K-ATPase eritrocitária, não apresentando alterações significativas nos demais parâmetros. Já o grupo tratado com DZP puro apresentou uma maior fragilidade osmótica quando comparado ao grupo controle. Foi observado um aumento de 43% no conteúdo de fosfolipídios de membrana após 60 minutos de tratamento. O índice de peroxidação lipídica não foi alterado, mas foi observada uma diminuição nos níveis de H₂O₂ e nas atividades da CAT e AChE. Além disso, outros marcadores de estresse oxidativo, como GPx e GSH, foram modulados pelo DZP de maneira tempo-dependente, e uma diminuição de 46% na atividade de Na,K-ATPase foi observada após 30 minutos de tratamento. Esses resultados indicam que o DZP foi capaz de alterar importantes parâmetros bioquímicos nos eritrócitos, como fragilidade osmótica, conteúdo lipídico, estresse oxidativo e atividade ATPásica da membrana de maneira tempo-dependente. Assim, os diversos efeitos aqui observados ressaltam a importância de estudos que avaliem o efeito dos BZDs nos eritrócitos, motivando o uso consciente e controlado desses fármacos e a busca de tratamentos alternativos, uma vez que o uso prolongado do DZP por indivíduos que já se encontram debilitados por doenças que comprometem as células sanguíneas pode afetá-los de maneira significativa.

O gênero Culex tem grande importância sanitária no Brasil, sendo transmissor da filariose e, recentemente, relatado como possível transmissor do Zika Vírus. Disseminada por todo o país, a prática do uso de inseticidas é a mais comumente empregada para o controle da proliferação de mosquitos. Estes inseticidas, usualmente, causam diversos danos aos insetos, seja alterando a atividade de algumas enzimas, como a Acetilcolinesterase (AChE), ou na produção excessiva de Espécies Reativas de Oxigênio (ERO’s), provocando paralisia ou mesmo a morte. Para os mosquitos, há relatos de que a resistência está associada às enzimas antioxidantes presentes nestes organismos, como a Superóxido Dismutase (SOD), que protegem os animais dos danos causados pelas ERO’s. Deste modo, o presente trabalho buscou avaliar os efeitos de inseticidas na via de estresse oxidativo e membranas celulares em larvas de 3º e 4º instar de Culex spp. Para tal, foram montadas cubas ao ar livre para a obtenção das larvas, em seguida elas foram expostas a CL₅₀ dos inseticidas. O organofosforado Temefós e o derivado da ivermectina, Ivomec, apresentaram menor CL_50, por isso foram selecionados para as análises de seus efeitos na membrana e estresse oxidativo das larvas. Os grupos de larvas foram expostos à CL₅₀ dos inseticidas por 24 horas e posteriormente, foi preparado material para realização de avaliação da atividade da bomba de Na⁺/K⁺-ATPase, dosagem dos níveis de GSH, Peróxido de Hidrogênio, Lipoperoxidação e Proteína Carbonilada, atividade das enzimas SOD e AChE. Inicialmente detectamos que a quantidade de proteínas totais decairam após os tratamentos com os inseticidas ainda que as larvas tenham sobrevivido aos tratamentos. Após, identificamos em ambos os tratamentos uma redução significativa da atividade da SOD, seguida de diminuição da quantidade de Peroxido de hidrogênio e GSH. A peroxidação lípidica foi menor nas larvas tratadas e proteína carbonilada diminui no tratamento com Ivomec e aumentou cerca de 3 vezes após tratamento com  Temefós. A atividade da Na⁺/K⁺-ATPase e AChE foi mais drasticamente inibidas após o tratamento com Temefós. Os resultados apontam para o desbalanço provocado pelos insetidas nas membranas e na função de enzimas importantes como a AChE. Além disso, percebe-se pelas alterações no sistema antioxidante, uma tentativa de adaptação as alterações provocadas pelo tratamento com os inseticidas.

Os esteróides cardiotônicos têm sido usados como fármacos cardíacos por mais de 200 anos e, atualmente vários estudos demonstram interessantes efeitos antitumorais com esteróides cardiotônicos para uma série de culturas celulares. A cisplatina tem desempenhado um papel crucial na quimioterapia e tratamentos anticâncer há mais de 30 anos. Porém, o tratamento com cisplatina pode causar efeitos colaterais graves, como mielossupressão, ototoxicidade e nefrotoxicidade, além dos processos de resistência celulares, já descritos na utilização prolongada da droga. Estudos anteriormente publicados, por nosso grupo de pesquisa, demonstraram um potente efeito sinérgico antitumoral entre digoxina 1nM e cisplatina 1µM em células de câncer de colo uterino (HeLa), além de elucidar uma possível via de sinalização que estaria desencadeando o processo antitumoral, onde foi demonstrado o efeito do tratamento combinado frente a atividade e expressão da Na,K-ATPase e o envolvimento de Src. O objetivo do presente trabalho é demonstrar o efeito do tratamento combinado entre digoxina e cisplatina sobre a ativação de Src, através de ensaios de expressão proteica e, o efeito do tratamento combinado sobre parâmetros de estresse oxidativo em células HeLa. Além de demonstrar o efeito do tratamento em outras linhagens celulares, tumoral e normal. O tratamento combinado demonstrou aumentar a expressão de Src fosforilada no resíduo de ativação (Tyr416), comprovando o envolvimento de Src no seu efeito citotóxico. Analisando os parâmetros de estresse oxidativo, observamos uma redução significativa em mecanismos de defesa antioxidantes celulares, atividade de SOD e conteúdo de GSH e, um aumento em 24 horas no conteúdo de H₂O₂, comprovando o aumento do estresse oxidativo celular frente ao tratamento combinado. Além disso, foram avaliados os níveis de peroxidação lipídica e formação de gotículas lipídicas, onde foi observado um aumento desses parâmetros após 48 horas de tratamento, o que já é descrito comumente em casos de estresse oxidativo. Frente às outras linhagens celulares testadas, A549 (células epiteliais de câncer de pulmão) e WI-38 (células normais de fibroblasto humano), o tratamento combinado não teve a capacidade de alterar significativamente a viabilidade celular em comparação ao controle. Nossos experimentos sugerem que o efeito antitumoral do tratamento sinérgico entre digoxina e cisplatina em células HeLa, parece estar correlacionado com o aumento de estresse oxidativo nesse tipo celular, mediante ativação de Na,K-ATPase/Src/EROS o que por sua vez, poderia culminar em diferentes efeitos celulares como, efeitos sinalizatórios, antiproliferativos e apoptóticos.

As epilepsias são desordens neurológicas manifestadas por crises epilépticas espontâneas e recorrentes, causadas por descargas neuronais hipersincronizadas. A Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) possui alta prevalência e elevada farmacorresistência, podendo evoluir com alterações morfológicas e moleculares no hipocampo, sendo necessário tratamento cirúrgico. Este trabalho visa estudar os parâmetros morfológicos e fatores moleculares relacionados à excitabilidade e à apoptose em regiões hipocampais de pacientes com ELT com início ictal à direita ou esquerda, submetidos ao tratamento cirúrgico, considerando avaliar novos alvos neuroprotetores. A avaliação morfológica hipocampal foi realizada pela análise do volume em Ressonância Magnética e parte do tecido removido pela cirurgia foi avaliado por western blot para quantificar proteínas envolvidas com a excitabilidade (Na+, K+-ATPase e GluR1) e com a via apoptótica (fator indutor de apoptose [AIF], citocromo c, caspases 8 e 3). Adicionalmente, foi avaliado o índice de correlação entre os fatores morfológicos e moleculares. A amostra foi composta por 18 pacientes, 13 pacientes operados à esquerda (ELTE) e 5 operados à direita (ELTD). Houve diminuição significativa no lado do início ictal quando se compara volume hipocampal total e regiões de cabeça e cauda com o lado contralateral, tanto de ELTE como ETLD, exceto para cauda de ELTD. Quando comparado com valores de indivíduo normais, atrofia do lado do início ictal em pacientes ELTD e ELTE, além de atrofia da cauda do hipocampo contralateral de ELTE. Quanto à expressão proteica, não foram encontradas diferenças quando se compara pacientes ELTE e ELTD em tecido de cabeça ou cauda hipocampal. Além disso, sugere-se que há correlação negativa entre o volume e a expressão de caspase-3, AIF, citocromo c, GluR1, α3 e α1 na cauda hipocampal, e na cabeça hipocampal para caspase 3, caspase 8, AIF, citocromo c, FXYD2, α3 e α1. Caspase 8 teve correlação positiva com cauda. GluR1 e α2 não apresentaram correlação com volume da cabeça e α2 e FXYD2 com volume da cauda hipocampal. Em síntese, existe presença de atrofia do lado ipsilateral ao início ictal, além de haver correlação entre volume hipocampal e expressão de algumas proteínas analisadas. Entretanto não foi observada diferença molecular entre cabeça e cauda hipocampais em ELTE e ELTD, não sendo possível estabelecer especificidade quanto à lateralidade ou as regiões hipocampais.

A composição lipídica e a fluidez da membrana plasmática podem ser alteradas pelos esteroides cardiotônicos e, consequentemente essa modulação lipídica pode afetar diretamente a função da Na, K-ATPase. Sabe-se que interação da Na,K-ATPase com caveolina-1 tem sido associada a manutenção da homeostase do colesterol nas células. Dessa forma, o principal objetivo do estudo foi avaliar o envolvimento da caveolina-1 na modulação lipídica da membrana plasmática causada por esteroides cardiotônicos. Para isso, utilizamos uma linhagem celular que possui cavéolas (HeLa), e uma linhagem celular que não possui o microdomínio (Caco-2). Avaliamos o efeito do tratamento com ouabaína ou 21-BD sobre a modulação do conteúdo de fosfolipídios totais por meio de métodos colorimétricos e incorporação de fosfato radioativo. Avaliamos a composição dos fosfolipídios, identificando o teor de fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidilinositol, esfingomielina e lisofosfatidilcolina, por HPTLC. Para investigar os efeitos do tratamento com os esteroides cardiotônicos sobre a modulação do colesterol da membrana, avaliamos o conteúdo e distribuição desse lipídio por filipina; e analisamos a expressão de caveolina-1. A ouabaína não teve efeito sobre o conteúdo de colesterol e fosfolipídios totais damembrana plasmática, embora tenha alterado pontualmente alguns fosfolipídios específicos nas duas linhagens celulares. A 21-BD aumentou o conteúdo dos fosfolipídios totais da membrana, elevando o teor de praticamente todos os fosfolipídios específicos. O tratamento com 21-BD não alterou o conteúdo de colesterol da membrana de células Caco-2, no entanto, notamos uma maior fluorescência emitida por filipina, indicando um maior percentual de colesterol em células HeLa. Além disso, somente a 21-BD causou uma redistribuição do colesterol para a região perinuclear das células HeLa e Caco-2. A expressão de caveolina-1 não foi alterada após o tratamento com os esteroides cardiotônicos. Portanto, demonstramos que os esteroides cardiotônicos testados, ouabaína e 21-BD, causaram alterações na composição lipídica que podem resultar na mudança da fluidez da membrana. Além disso, observamos mudanças no conteúdo de fosfolipídios importantes para diferentes funções celulares. Embora o colesterol tenha sido redistribuído nas duas linhagens celulares, foi observado um aumento do conteúdo desse lipídio somente nas células que possuem cavéolas. No entanto, a caveolina-1 não parece estar envolvida no aumento de colesterol, porém pode ter um papel fundamental no transporte do colesterol para a membrana plasmática.

O Glioblastoma Multiforme (GBM) é o tipo de neoplasia mais agressiva do sistema nervoso central. Apesar de raro, apresenta péssimo prognóstico e taxa de sobrevida baixa. As estatísticas mostram o aumento da incidência do câncer com tendência linear de crescimento da taxa de mortalidade. Além disso, o GBM não possui cura. Embora alguns tratamentos já estejam estabelecidos contra este tipo de tumor, são conhecidos por serem altamente invasivos. Neste contexto, busca-se como alternativa a amplitude de compostos secundários que os produtos naturais podem oferecer, com propriedades biológicas e terapêuticas. Diante disso, o objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade antitumoral de derivados da espécie Macairea radula sobre linhagens celulares de glioma humano. Primeiramente, como controle positivo, foi avaliada a citotoxicidade da Temozolamida (TMZ) sobre as linhagens tumorais (U251 e GAMG) e sobre a linhagem de astrócito normal - NHA, por 24 e 72 horas. A partir da concentração inibitória determinada, foi calculado o Índice de Seletividadade Tumoral (IS) do quimioterápico. Foi observado que a TMZ não apresentou seletividade para nenhuma das linhagens tumorais estudadas. Paralelamente, as partições Hexânica e Clorofórmica da M. radula foram selecionadas através de triagem prévia para fracionamento por cromatografia em coluna. Foram obtidas 6 frações derivadas da partição B e 8 derivadas da partição C. Foi avaliada a citotoxicidade de 12 das frações obtidas, concomitantemente às partições B e C sobre as linhagens U251, GAMG e NHA, em 24 e 72 horas. Após determinada a CI50, foi calculado o IS de cada um dos correspondentes extratos. Aquelas frações que apresentaram maior IS com CI50 de 72 horas foram selecionadas para os posteriores ensaios - 23-B3, 23-B4, 23-B5 e 23-C6. Alterações morfológicas características, em resposta à citotoxicidade das frações, foram observadas. Em corroboração, foi realizada a caracterização de morte celular, através do ensaio por fluorescência. Foi observado que houve aumento significativo das células em estágio de morte das células tratadas em relação ao controle, com características predominantemente apoptóticas. Posteriormente, foi avaliada a capacidade dos extratos selecionados de inibir a migração das células tumorais, pelo ensaio de Wound Healing. Foi observado que nenhuma das frações testadas foi capaz de inibir, nem de reduzir a migração das linhagens U251 e GAMG. Em concordância, foram observadas projeções de superfície, mesmo quando as células foram tratadas. O efeito das frações de M. radula sobre a atividade da Metaloproteinase de Matriz 9 (MMP-9) foi avaliado por zimografia. Foi observado que as frações 23-B4, 23-B5 e 23-C6 foram capazes de reduzir a atividade da enzima proteolítica. Adicionalmente, as frações com potencial de reduzir a atividade da protease foram avaliadas sobre a adesão da linhagem U251. Foi possível perceber que as amostras modularam o complexo envolvido com a manutenção das junções, uma vez que aumentaram a adesividade celular. Além disso, a afinidade da Anexina V pela fosfatidilserina foi testada qualitativamente, após tratamento das células (U251) com as frações 23-B4, 23-B5 e 23-C6. Observou-se que o número de células marcadas com a fluorescência foi analiticamente maior quando submetidas ao tratamento. Em adição, pôde-se verificar maior concentração dos marcadores na região celular periférica. Pela especificidade do teste, os dados podem indicar a indução de morte celular por apoptose. Baseado nisso, tais resultados foram utilizados como critério de seleção das proteínas, cuja a expressão foi avaliada por Western Blotting. Tendo isso em vista, o efeito das amostras sobre a modulação de enzimas apoptóticas foi verfificado sobre a U251. A fração 23-B4 não apresentou capacidade de modular significarivamente nenhuma das proteínas avaliadas. Já as frações 23-B5 e 23-C6 foram capazes de regular a expressão de proteínas envolvidas com a indução da morte celular programada, independente da ativação das Caspases. Apresentaram o mesmo perfil de atuação, e mostraram ativar fatores apopotóticos intrínsecos. Finalmente, a fração que apresentou maior seletividade tumoral (23-B5) foi avaliada, in vivo. A fração foi capaz de reduzir expressivamente o perímetro tumoral e potencial sobre a modulação negativa de fatores angiogênicos. As amostras foram capazes de modular parâmetros envolvidos na progressão do tumor, sendo considerados promissores candidatos antitumorais.