DESENVOLVIMENTO E APLICAÇÃO TECNOLÓGICA DE NOVOS MARCADORES MOLECULARES MULTIESPECÍFICOS DE DNA PARA PEIXES DE PIRACEMA DE IMPORTÂNCIA SOCIOAMBIENTAL
As espécies Salminus brasiliensis, Brycon orbignyanus, Prochilodus lineatus e Megaleporinus obtusidens possuem grande importância ecológica, econômica e cultural na América do Sul. Estes organismos encontram-se ameaçados por vários fatores como barragens hidrelétricas, introdução de espécies invasoras, poluição e degradação do habitat. Os marcadores moleculares microssatélites são importantes ferramentas biotecnológicas, destacando para o estudo da variação genética de populações devido às suas características de codominância, hipervariabilidade e distribuição no genoma. Embora esses marcadores sejam normalmente de caráter espécie-específicos, o que exige o seu desenvolvimento de novo para organismos de interesse, uma forma tradicional de contornar essa limitação é sua transferência para espécies próximas (amplificação cruzada ou heteróloga). No entanto, isso apresenta alguns entraves, como o baixo aproveitamento de loci testados, além da possível ocorrência de alelos nulos. A facilitação recente de obtenção de dados genômicos permite a comparação direta de regiões de DNA conservadas entre espécies. Diante disso, este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento biotecnológico de marcadores microssatélites multiespecíficos, capazes de serem aplicados simultaneamente em uma ampla gama filogenética de espécies de peixe de piracema, como S. brasiliensis, B. orbignyanus, P. lineatus e M. obtusidens, abrangendo pelo menos três famílias taxonômicas distintas. Foram selecionados 30 potenciais loci candidatos conservados e compartilhados entre genomas, a partir de um painel mais amplo de 977 loci microssatélites caracterizados por sequenciamento de nova geração. Dentre estes, 13 loci microssatélites (Poli09, Poli11, Poli12, Poli18, Poli19, Poli20, Poli21, Poli23, Poli25, Poli26, Poli28, Poli31 e Poli32) apresentaram amplificação em todas as espécies-alvo; sete loci amplificaram em pelo menos uma das espécies-alvo, enquanto 10 loci não apresentaram amplificação. A avaliação da variabilidade genética foi realizada com uma amostra populacional de 20 indivíduos de cada espécie-alvo, provenientes da bacia do rio Grande, MG (S. brasiliensis, B. orbignyanus, P. lineatus e M. obtusidens). A análise populacional identificou até 17 alelos em S. brasiliensis, até 16 alelos em B. orbignyanus, até 13 alelos em P. lineatus e até 12 alelos em M. obtusidens. Os loci que estão em conformidade com o Equilíbrio de Hardy-Weinberg são: Poli18 e Poli20 em S. brasiliensis; Poli20, Poli23, Poli25, Poli26 e o Poli31 em B. orbignyanus; Poli18 e Poli25 em P. lineatus, e em M. obtusidens Poli11, Poli20, Poli25, Poli26 e o Poli28. No locus Poli11, a amostra de B. orbignyanus exibiu caráter monomórfico o que pode evidenciar a baixa variabilidade genética em estoques dessa espécie. Os resultados parciais deste estudo permitiram, até o momento, o desenvolvimento de um conjunto de 13 marcadores microssatélites multiespecíficos, que são capazes de revelar polimorfismos de microssatélites em pelo menos quatro espécies. A utilização desses marcadores multiespecíficos oferece vantagens como a redução de custos e aumento da celeridade nas análises genéticas, o que facilita o manejo de estoques naturais e cultivados dessas espécies, facilitando operações que envolvam o policultivo, para finalidades de mitigação de impactos ambientais, ou comercial, fornecendo subsídios para o manejo da pesca e desenvolvimento da aquicultura no país.