Produção, caracterização e avaliação da atividade antimicrobiana de inibidores de proteases obtidos em cultura de calos e em suspensões celulares de Bauhinia holophylla
Bauhinia spp.; cultura de tecidos vegetais; calogênese; inibidores do tipo Kunitz; atividade antitríptica.
Bauhinia holophylla é uma espécie nativa do Cerrado com grande potencial biotecnológico, como fonte para a produção de proteínas bioativas em sistemas de cultura de tecidos. Este trabalho tem como objetivo geral produzir, caracterizar e avaliar a atividade antimicrobiana de inibidores de proteases (IPs) obtidos em cultura de calos e em suspensões celulares de B. holophylla. Para a indução de calos, explantes foliares provenientes de plântulas cultivadas in vitro foram inoculados em meio WPM suplementado com 30 g L-1 de sacarose, solidificados com 7 g L-1 de agar e acrescidos de 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) (0; 4,52; 9,05; 18,10 μM) e BAP (6-benzilaminopurina) (0; 4,44; 8,88; 17,75 μM) e suas possíveis combinações, na presença e ausência de luz. Após XXX dias da inoculação, avaliou-se a cor e a consistência dos calos, a porcentagem de indução de calos, matéria fresca e os teores de IPs. Calos induzidos em meios acrescidos de XXX μM de 2,4-D (calos friáveis) e 4,52 μM de 2,4-D + 17,75 μM de BAP (calos compactos), na ausência de luz foram submetidos a cinco subcultivos consecutivos, por seis semanas cada, sendo que na quarta, quinta e sexta semanas de cada subcultivo, os teores de IPs foram avaliados. Duas curvas de crescimento foram estabelecidas por um período de 140 dias, a partir de novos explantes foliares cultivados em meio WPM contendo XXXX μM de BAP/2,4-D (calos compactos), na presença de luz (tratamento X) e XXXX μM de BAP/2,4-D (calos compactos), na ausência de luz (tratamento Y). Colocar os resultados gerais do experimento da calogênese. Calos produzidos com tratamentos E11 e C2 atingiram a maior massa fresca aos 91 dias, com 1,427 e 1,120 g, respectivamente. Perfis eletroforéticos revelaram bandas proteicas compatíveis com inibidores da família Kunitz, presentes nos calos. Os resultados demonstraram a influência do meio de cultivo sobre a indução de calos em B. holophylla e forneceram parâmetros para a coleta de biomassa e para etapas posteriores de isolamento e testagem dos inibidores.